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开口箭皂苷对人神经胶质瘤细胞作用及相关机制研究.doc

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文档介绍:开口箭皂苷对人神经胶质瘤细胞作用及相关机制研究
  蔡晶,雷林生,朱正光,迟德彪
  【摘要】目的讨论开口箭皂苷体外对人神经胶质瘤U251细胞的作用和其相关机制。方法开口箭皂苷作用于U251细胞后检测其I50值。溶血实验观察开口箭皂苷对TB〔50μg/l〕处理指数生长期U251细胞36h,提取U251细胞DNA上1.5%琼脂糖凝胶电泳进展琼脂糖电泳片断化分析,在紫外灯下观察结果并拍照。
  1.6STB对U251细胞[a2+]i的影响
  Petri培养皿内细胞培养48h,PBS漂洗后参加Flu-3-A37℃避光孵育30in,PBS漂洗后参加0.5lPBS上机检测,处理组参加浓度为50μg/l的STB溶液0.5l,观察其动态变化。
  1.7STB对U251细胞内pH值的影响
  Petri培养皿内细胞培养48h,漂洗后参加SNAFL染液37℃避光孵育30in,PBS漂洗后参加0.5lPBS上机检测,处理组参加浓度为50μg/l的STB溶液0.5l,观察其动态变化。
  1.8STB对bax,bl-2基因表达的影响
  以STB〔50μg/l〕分别处理指数生长期U251细胞12,24,36h后,提取总RNA进展RT-PR反响。分别取被检测基因bax,bl-2和β-atinRT-PR扩增产物上样于琼脂糖凝胶中电泳后,将凝胶转移至凝胶分析系统暗箱中,在紫外线照射下测定PR扩增产物的荧光强度值〔vlue〕。结果表示为:〔被检测基因扩增产物荧光强度值/相应β-atin扩增产物荧光强度值〕×100%。
  1.9统计学处理方法数据以±s表示,采用SPSS10.0软件,经方差齐性检验后对细胞内钙离子浓度变化和pH值变化行重复测量数据的方差分析,bax基因表达量变化和bl-2基因表达量变化行配对t检验,以P<0.05定为差异有统计学意义。
  2结果
  2.1STB体外抗U251细胞增殖的影响
  实验结果提示STB体外对U251细胞的增殖有抑制作用,且随浓度的增加D570吸光度值相应下降,说明抑制作用相应进步。经计算,半效抑制浓度I50值为8.5μg/l,其可信区间为4.63~12.66μg/l。
  2.2STB的溶血作用
  血细胞悬液与药物混合静置24h后,出现明显分层现象,上层透明无色,下层红色,肉眼观察下各浓度STB给药组均未见明显溶血现象。
  2.3STB对U251细胞DNA影响
  U251细胞经STB处理48h后,诱导其DNA出现片断化,在琼脂糖凝胶电泳上呈现明显的“Ladder〞条带。
  2.4STB对U251细胞[a2+]i的影响以Flu-3-A为荧光探针,进入细胞后,A被胞浆水内脂酶水解,探针与[a2+]i结合后产生绿色荧光,其强度随胞浆[a2+]i浓度升降增强或减弱。扫描60s后参加50μg/lSTB0.5l,可见荧光强度迅速减弱〔图1〕。
  2.5STB对U251细胞膜内pH值的影响
  以SNAFL为荧光探针,脂溶性的SNAFL进入细胞后,用LS检测的发出的红色荧光强度可显示细胞内的pH值程度。在60s以50μg/lSTB刺激U251细胞,呈现荧光强度缓慢下降的趋势〔图2〕。
  2.6STB对bax,bl-2基因表达的影响
  PR结果如图3所示,bax基因表达量升高,bl-2基因表

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上传人:卢卡斯123 2022/7/3 文件大小:21 KB

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