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大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性.doc

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文档介绍:大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性

  【关键词】系膜细胞;衰老;细胞表型;p21af1/ip1/sdi1
  theharateristiandsignifianefratesangialellsithadvaningage

 大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性

  【关键词】系膜细胞;衰老;细胞表型;p21af1/ip1/sdi1
  theharateristiandsignifianefratesangialellsithadvaningage

  departentfnephrlgy,kidneyinstitutekeylabfpla,hinesegeneralhspitalfpla,beijing100853,hina

  【keyrds】esangialells;senesene;phentype;p21af1/ip1/sdi1
  多数学者认为,器官衰老是由于其固有细胞功能减退所导致,肾小球系膜细胞作为肾脏最重要的固有细胞之一,具有调节肾血流量,分泌细胞外基质、炎症介质等功能,其表型和功能的改变在肾脏衰老进程中必然发挥着重要的作用。为了能客观真实地反映肾小球系膜细胞随衰老的变化,排除体外培养环境对细胞表型的影响,本研究应用自然衰老的24月龄大鼠,体外培养原代的肾小球系膜细胞,观察系膜细胞是否随机体增龄而衰老,以及老年大鼠系膜细胞p21af1/ip1/sdi1表达的变化,为进一步研究系膜细胞衰老的作用机制奠定基矗
  1材料与方法

  1.2四***偶氮唑盐〔tt〕法检测细胞增殖才能系膜细胞生长至80%交融,0.25%胰酶消化,计数后接种于96孔板,2000个细胞/孔,细胞贴壁后,继续培养24、48、72、96、120h,参加tt(5g/l)10μl孵育4h后,加二***亚矾〔ds〕200μl/孔裂解细胞,避光10in,于492n波长记录吸光度值。



  1.6大鼠原代系膜细胞间接免疫荧光染色不同组细胞贴壁后,用3%多聚甲醛+2%蔗糖37℃固定10in,pbs洗3遍,冰上透化10in,pbs洗3遍,1%牛血清白蛋白〔bsa〕冰上封闭10in,p21af1/ip1/sdi1小鼠单克隆抗体,37℃孵育1h,4℃过夜,含吐温20的tbst洗10遍,trit标记的山羊抗小鼠igg,避光室温孵育1h,tbst洗10遍,荧光显微镜下照相。
  1.7统计学处理使用spss11.0软件进展统计分析,计量资料使用x±s表示,组间差异比拟采用单因素方差分析。
  2结果
  2.1不同月龄大鼠原代系膜细胞生长及表型特征3、12及24月龄大鼠的原代系膜细胞均为长梭形或不规那么星形,贴壁后生长迅速,约3~4d后可传第1代。传代后,3、12月龄大鼠的系膜细胞仍保持旺盛的增殖才能,约2~3d传1代,3月龄大鼠系膜细胞可传20代左右;而12月龄大鼠系膜细胞可传10代以上。24月龄大鼠的系膜细胞生长速度明显较3及12月龄大鼠系膜细胞减慢,约5~7d才可传1代,群体倍增时间较前者系膜细胞延长1倍以上。而且传至第2~3代后,细胞肥大,形态变扁平、伸展,代谢减慢、生长停滞,失去增殖和传代才能。
  2.2不同月龄大鼠原代系膜细胞增殖才能tt法检测结果显示,24月龄大鼠系膜细胞72,96及120h的d值〔0.314±0.0

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上传人:卢卡斯6687 2022/7/3 文件大小:15 KB

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