文档介绍：大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察
宋嵬，曾水林，朱建宝，王磊，李升，阎荣，李凤飞
【关键词】,大鼠；神经前体细胞；神经节,脊；细胞培养技术；免疫荧光组织化学
bservatinfneuralpreursrellsinG，置于40g/L多聚甲醛内后固定，次日行冰冻切片，，分别行HE染色和BrdU/Nestin,P75/：DRG切片入苏木精染液染色，水洗玻片上多余染液，10L/，；1～5g/L伊红染液染色，依次经700,850,1000L/L乙醇脱水；二甲苯透明，：依次参加500L/L甲酰***，2×SS,1l/L盐酸,1g/L胰蛋白酶及封闭羊血清后，再参加小鼠抗大鼠BrdU抗体〔1∶200〕，4℃过夜,参加山羊抗小鼠IgG:TRIT〔1∶300〕，加封闭羊血清，加小鼠抗大鼠Nestin抗体〔1∶200〕，4℃8h，加山羊抗小鼠IgG:FIT〔1∶300〕，：依次加封闭羊血清，兔抗大鼠P75抗体〔1∶200〕，4℃过夜，参加山羊抗兔IgG:TRIT〔1∶300〕，小鼠抗大鼠Nestin抗体〔1∶200〕，4℃8h，山羊抗小鼠IgG:FIT〔1∶300〕，,别离出DRG，DE液冲洗，剪碎，，离心5in，1000r/，所得细胞用含有EGF，×108/〔37℃,50L/L2〕.取成年大鼠麻醉后，脱颈处死消毒，〔方法同前〕.,,参加100L/L胎牛血清终止消化，再用吸管吹打成单细胞悬液，离心弃上清，×108/L，种入新的培养瓶中，继续按照先前条件，,用培养液稀释到2×103/L，接种入96孔培养板中,，，，分为三组，前两组分别参加5μl/L的BrdU,100L/L胎牛血清，,对参加BrdU的培养孔中的细胞进展抗BrdU的免疫荧光组织化学染色〔TRIT标记〕.对参加胎牛血清的培养孔的细胞分别进展GFAP,NF的免疫荧光组织化学染色〔GFAP用TRIT标记，NF用FIT标记〕.第三组进展Nestin免疫组织化学染色〔SAP法〕，、倒置显微镜下观察，并照相记录.
，整个DRG呈梨形，其外膜的结缔组织伸入节内，