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第六章:胚乳培养.ppt

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第六章:胚乳培养.ppt

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文档介绍:第六章:胚乳培养
第一页,共35页。
胚乳培养
胚乳在被子植物中,大多数(超过81%)是双受精产物。当雄配子进入胚囊时,它由二个极核和一个雄配子融合而形成的胚乳核发育而成,所以在倍性上大多属于三倍体组织。
胚乳又是供胚生长发育时期的胚乳也能获得成功,如蓖麻、巴豆、麻风树、罗氏核实木等。
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胚乳培养中应注意的问题
植物种类不同,胚乳生长旺盛阶段的日期也不会一样,此时的胚乳具有:胚已分化完成,胚乳已充分生长,几乎达到成熟时大小;外观为乳白色半透明的固体,且富有弹性等特点。在开始对任何一种植物进行胚乳培养时,除了要查阅有关文献外,还应事先按期采集和固定开花的材料作为系统观察,以确认该植物胚乳的发生类型和发育时期,为下一步深入工作打好基础。
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胚乳培养中应注意的问题
不同的植物胚乳的最适宜取材日期是不同的,在单子叶植物中,百合是传粉后的9~10天,水稻是传粉后的5~7天,玉米是8~11天,小麦是8~11天,大麦是8天,小黑麦杂种胚乳是7~14天。在双子叶植物中,黄瓜是传粉后的7~10天,苹果为传粉后的30天,猕猴桃则要80天左右,梨、枸杞为未成熟胚乳,檀香为成熟胚乳。
第十七页,共35页。
胚乳培养中应注意的问题
总之,工作一开始,要认真对不同发育时期胚乳进行培养,筛选出一个最适宜于诱导及分化的胚乳取材时间是培养成功的保证。
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胚乳培养中应注意的问题
2. 严格区分胚乳与其他组织
取胚乳接种时,由于胚乳包围着胚,如何绝对地使胚乳与胚分离而不带胚或包裹着胚的珠心、珠被组织,是保证实验正确性的重要环节。否则,在胚乳外植体中混入二倍体细胞或组织,它们增殖一般又较胚乳快,这样不但影响了胚乳的诱导和分化,而且常常会形成二倍体愈伤组织与胚乳愈伤组织混杂的局面。
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胚乳培养中应注意的问题
为了保证获得纯净一致的胚乳外植体,在接种后3~4天内应及时观察、检查。把一些变绿(胚及胚的切碎部分,在培养早期容易出现色泽),或其它异样色泽的接种物除掉。但如果要进行胚在胚乳培养中作用的试验,则可将胚与胚乳放在同一培养基中培养并使胚与胚乳分开放置在不同的位置。
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胚乳培养中应注意的问题
关于胚在胚乳培养中的作用问题,Bhojiwani(1966)在巴豆和罗氏核实木的研究中,认为胚乳培养中必须有胚存在,胚乳愈伤组织和体胚的产生以及增殖均依赖于胚在生长过程中产生的代谢产物(胚因素)来提供营养。在枸杞胚乳培养中,带胚的试验,均出现提高了胚乳愈伤组织诱导率的效果。但在小黑麦、水稻、大麦、苹果、马铃薯等的胚乳培养中,不带胚的胚乳培养,同样也可产生愈伤组织或分化出胚状体和芽。
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胚乳培养中应注意的问题
3. 合理使用植物激素
植物激素的种类和浓度对胚乳愈伤组织的诱导和器官建成起着决定性的作用。在不加任何激素的培养基上,胚乳外植体很少或完全不能启动。不同植物的胚乳培养要求有不同的外源激素及合理的细胞分裂素与生长素的配比。如大麦胚乳愈伤组织产生和生长,2,4-D是必要的,柚胚乳植株的产生必须加入高浓度(15mg/L)赤霉素;
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胚乳培养中应注意的问题
猕猴桃胚乳培养时,当玉米素3mg/L与2,4-,产生胚性愈伤组织,并在1mg/L玉米素中分化出体细胞胚,如果玉米素3mg/,则不产生愈伤组织而是直接分化出叶状体,在低浓度玉米素1mg/L中产生芽。所以,植物激素的不同与浓度配比对胚乳愈伤组织的诱导及分化方向有着微妙的影响。
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胚乳培养中应注意的问题
4. 注意光、温及pH值的影响
胚乳培养对温度的要求,一般在24~28 ℃之间,在玉米胚乳培养时,25 ℃时是玉米胚乳培养的最适温度,30 ℃时,生长比25 ℃至少减少了50%,20度时则下降了4倍。麻风树和蓖麻的胚乳则以24~26 ℃时生长最好。
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胚乳培养中应注意的问题
对光线反应,不同植物也不同。玉米胚乳适于暗培养,蓖麻则在1500lx的连续光照下生长较好。而对黑麦草的胚乳愈伤组织,光照未显示出任何明显的影响。一般植物多用交替光照,即10~12h光照,14~12h黑暗条件下培养。
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胚乳培养中应注意的问题
pH值的作用,~,~,,,。
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操作实例
1. 猕猴桃胚乳的培养
(1)材