文档介绍：上海好贴卫生用品有限公司菌种传代操作规程
代前将购进菌种及灭菌后的营养琼脂小斜面置于室温放置 30 分钟，待温度平衡后
再移入阳性操作室内。
换好衣服，戴好口罩、手套，用消毒水将手清洗干净。
第二、三代工作菌种的制备：
从超低温冰箱中取出所需的菌种冷冻管，置于 35～40℃的水浴中进行解冻 1 分钟。解冻
后，放入生物安全柜内，用冷却后的灭菌接种环从冷冻管中取一环菌液接种于 10ml 灭菌营
养肉汤培养基中，置于 30～35℃的培养箱内 18～24 小时，进行增菌培养。〔第二
代〕培养后，用冷却的灭菌接种环从增菌液中沾取一环接种于相应的培养基斜面上贴上菌
种标签，置于 30～35℃的培养箱内 18～24 小时，进行培养。确认符合后置于 5℃的冰箱
内保存。使用时将培养出的斜面用 5ml 的灭菌生理盐水将斜面上的菌落洗下制成菌悬液使
用。〔第三代〕在第三代菌种有效期内进行第四代的接种传代。
第四、五代工作菌种的制备：
从 5℃的冰箱内取出第三代工作菌种，用冷却的灭菌接种环挑取 1 个菌落接种于相应的琼
脂斜面培养基中，置于 30～35℃的培养箱内培养 18～24 小时后，确认符合后置于 5℃的
冰箱内作为第四代工作菌种保存，备用。
接种操作规范
点燃酒精灯，左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种
环烧红 30 秒钟，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过 3 次。右手用无名
指、小指及掌部夹住硅胶塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拨开硅胶塞，将
接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮取少量菌苔，随
即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。塞上硅胶塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂
小斜面一支，右手用无名指、小指及掌部夹住硅胶塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右
手再轻轻拨开硅胶塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部，由低向上，将接种环轻贴斜
面的表面曲折移动，使菌划在斜面的表面上。
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