文档介绍：生物化学实验二：DNA的琼脂糖凝胶电泳
指导教师：李玉芹
一、目的
通过本实验学****琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。
二、 原理
琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DN***段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分生物化学实验二：DNA的琼脂糖凝胶电泳
指导教师：李玉芹
一、目的
通过本实验学****琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。
二、 原理
琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DN***段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭（ethidum bromide ,EB），在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带，在电场中，，凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。
琼脂糖凝胶有如下特点：
(1) DNA的分子大小在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用对数值成反比，分子越大迁移得越慢。
(2) 琼脂糖浓度一个特定大小的线形DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。
(3) 电压低电压时，线状DN***段迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量DN***段的迁移率将以不同的幅度增长，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DN***段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。
(4) 电泳温度DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温度影响不明显，不同大小的DN***段其相对迁移速率在4℃与30℃之间不发生明显改变，%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱，最好在4℃条件下电泳。
(5) 嵌入染料荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA，染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15%。
(6) 离子强度电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA电泳迁移率。在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶，电导率最小，DNA几乎不移动，在高离子强度的缓冲液中（如误加
10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化。
对于天然的双链，常用的几种电泳缓冲液有TAE、TBE等，一般配制成浓缩母液，室温保存，用时稀释。
三、主要仪器
1. 恒温培养箱 2. 琼脂糖凝胶电泳系统
3. 微波炉 4. 紫外线透射仪
四、试剂
***氨基甲烷（Tris）
***四乙酸(EDTA)
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五、实验步骤
①5×TBE(5倍体积的TBE贮存液)
配1000ml 5×TBE:
Tris 54g
硼酸
EDTA 20m