文档介绍：精选课件
核酸凝胶电泳
用于分离、鉴定和纯化DNA或RN***段
优点：
便于分离；便于检测；便于回收
精选课件
琼脂糖凝胶电泳是以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分
精选课件
基本过程：制胶 放入电泳槽中并加入电泳缓冲液 取出梳子 将适量的核酸样品和上样缓冲液混合并上样于加样孔中 一定电压条件下电泳 合适的时间后停止电泳 取出凝胶进行溴化乙锭染色 凝胶成像系统紫外灯下观察并照相保存结果
注意：溴化乙锭具有致癌性，操作时要带手套
精选课件
（1）琼脂糖凝胶电泳的基本过程
精选课件
精选课件
上样缓冲液的三个作用
（1）增加样品密度保证DNA沉入加样孔内
（2）使样品带有颜色便于简化上样过程
（3）其中的染料在电场中可以预测泳动速率向阳极迁移。
精选课件
6*上样缓冲液成分：
精选课件
（2）琼脂糖凝胶中DNA的检测
通过染色, 紫外灯下检测。
主要有溴化乙锭（ethidium bromide, EB）染色法和SYBR Gold染色法。
精选课件
凝胶的EB染色
（1）EB被认为是一种强致癌物质,见光分解。
（2）EB可用来检测单链或双链核酸
精选课件
（3）EB使用时的配制、贮存及使用
EB常用水配制成10 mg/ml的贮存液，于室温保存在棕色瓶或用铝箔包裹的瓶中， μg/ml 。
（4）当要知道DN***段准确大小时，凝胶应在无EB情况下电泳，电泳结束后再用EB染色。
精选课件
EB替代品
SYBR Gold是一种新型极敏感染料的商品名称。其与DNA结合的亲和力高，并且结合后，能够极大增强荧光信号。
精选课件
sybr-green、sybrgold ---- 不稳定，毒性也很大
goldview ----宣称无毒,不灵敏,回收连接不好,荧光易猝灭。对于大片段DNA的染色效果还凑合，但是在对于500bp以下的片段效果不是很好。
GelRed/GelGreen低毒,效果很强!但价格昂贵。
精选课件
精选课件
（3）结果分析
提取细菌基因组电泳图
精选课件
琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡过程中
DNA Ladder的形成
PCR产物的电泳
精选课件
RNA电泳图
精选课件
1、溴乙锭(EB)是诱变剂 ，应戴乳胶手套。凡是沾污过溴乙锭的器皿或物品,必须经专门处理后，才能进行清洗或弃去。
    2、加样量的多少决定于加样孔最大容积。加入样品的体积应略少于加样孔容积。
精选课件
DNA带很淡或无带
精选课件
DNA带拖尾
精选课件
精选课件
精选课件
紫外吸收法、定磷法
（1）目测条带亮度来判断DNA浓度 跑胶时候marker 按说明书的量上样电泳，电泳完毕后，就可将目的DNA条带和marker 条带的亮度做个大致的比较。        找出两者最接近亮度的条带。根据条带的亮度、大小大致就可推测目的DNA的浓度。 在通过目测DNA浓度的时候，最好要把加样量设一个梯度，如果质粒的量很浓的话。
精选课件
（2）分光光度法
DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。
波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。
对标准样品来说，浓度为1μg / ml时，DNA钠盐的OD260＝
当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg / ml
               ssDNA浓度约为37μg / ml
               RNA浓度约为40μg / ml
               寡核苷酸浓度约为30μg / ml（由于底物不同有差异
精选课件
当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。
一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。
精选课件
经验值：
纯DNA：OD260/OD280≈(＞,表明有RNA污染；＜，表明有蛋白质、酚等污染）
纯RNA： ＜OD260/OD280＜（＜；＞***酸残存）
若样品不纯，则比值发生变