文档介绍：1 高效液相色谱法测定肌酐清除率【关键词】尿肌苷肌苷清除率色谱法测定尿中假尿苷排出量时, 文献报道[ 1,2 ]多采用其与尿肌苷( UCr )的比值来消除尿液浓缩或稀释对结果的影响。 UCr 多数以碱性苦味酸(Jatfe 法) 连续监测法测定, 但此法的特异性差, 许多有机酸、糖和蛋白质等会产生阳性干扰, 基质效应和背景色在强碱中氧化为无色则会产生阴性干扰, 为了解这些干扰的程度, 我们对 Jaffe 法测定血清肌苷( SCr ) 和 UCr 以及肌苷清除率( CCr )的结果同 HPLC 法的测定结果进行了比较分析。两法测定 SCr 的比较已有报道, 但尚未见两法测定 UCr r 的报道。 1 材料与方法 仪器和试剂 仪器高效液相色谱仪(包括C拟 R4 A 数据处理机、 SPD 拟 6A V 检测器、 LC 拟 9A 送液泵、 DGU 拟 4A 脱气机、 CTO 拟 6A 柱箱、 SCL 拟 6B 控制器和 SIC 拟 6B 自动进样器) 为日本岛津制作所产品。 CIBA 拟 CORNINGEXPRESSPLUS 自动生化分析仪为美国康仁公司产品。 2 试剂肌酐(Cr) 标准品为美国 Sigma 公司产品, Cr 测定试剂盒(Jaffe 法) 为意大利 Sclavo 公司产品, 其他为国产分析纯试剂。 标准品和样品的制备与前处理 标准品将Cr 用重蒸馏水配成浓度为 μ mol/ L 的标准液 S1, 再倍比稀释为 S2 、 S3 … S6 。准确吸取上述标准液各 100 μ l, 分别滴加 甲醇, 漩涡振荡器上混匀,于 6000r/min 离心 10min, 取上清液 于干净试管中,在氮气流下吹干,分析前以流动相 300 μl 复溶, 漩混 1min, 自动进样 45μl 进行色谱分析。 样品( 正常对照 30 例及本院患者 23例) 取血清或 40 倍稀释的 24h 混合尿样 100 μ l, 分别滴加 甲醇后的处理同标准品。 色谱分析条件分析柱:Shim 拟 packCLC 拟 ODS15cm × ; 预柱:Shim 拟 packCLCG 拟 ODS(4); 流动相为 , 用磷酸调至 ; 流速为 1ml/min; 柱温 35℃;; 波长开始设为 233nm ,色谱分析至 时自动变换为 263nm, 至 10mi n 时分析结束, 重新设为 233nm,12mi n 时开始下一试样分 3 析。定量分析前对该条件下的色谱峰进行了充分的定性分析[3]。 法采用动力学法: 波长 510nm, 时间 60s, 样品体积 27μl,试剂体积 270 μl。 系列标准液和样品加甲醇处理前用自动生化分析仪测得 Jaffe 法结果( 0), 处理后先测得 HPLC 结果( 血清和尿液同时测定者 r), 然后再测得处理后(Pre 拟) 的血清和尿样的 Jaffe 法结果[ 1]。 2 结果 法和 Jaffe 法的工作曲线的线性回归方程分别是 Y( 浓度)=+( 峰高)和 Y(浓度)=-+4417.