文档介绍：山东大学实验报告 2014年 12月 30 日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者：
科目 微生物学实验 题目 微生物综合实验 共 31 页 微生物实验报告
。土壤是微生物生活的大本营，可以从中分离到很多有价值的菌株。此次实验采取平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。 微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态， 也可以用肉眼观察其菌落形态。 前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。
平板分离法主要有： I平板划线分离法 ，还可用于测定样品中活菌数量。
平板菌落计数法: 是将待测菌液经过适当稀释，涂布在平板上,经过培养后，在平板上形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖形成的，有的可能来自2个或多个细胞。因此，平板菌落计数的结果往往比样品中实际细胞数低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
④菌落形态描述: 通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，将样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。
微生物基本鉴定
革兰氏染色
革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G- 表示。
细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；
革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
山东大学实验报告 2014年 12月 30 日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者：
科目 微生物学实验 题目 微生物综合实验 组别 3
微生物实验报告
芽孢染色
芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子，通常为圆形或椭圆形。在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。是否产生芽孢，以及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。 
与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚而致密，通透性低，不易着色，但是，芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时，菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍保留。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 
3、细菌运动性检测——半固体穿刺法 
将细菌穿刺培养于半固体培养基中，经培养后，无鞭毛的细菌沿穿刺线生长，穿刺线清晰说明该种菌不具有运动性；有鞭毛的细菌沿穿刺线向四周扩散，穿刺线模糊不清，说明该种菌具有运动性。
同时可从半固体穿刺实验结果中得到菌体是厌氧性还是好氧性菌。若为厌氧性菌，穿刺线下方的菌较多，且若有运动性，扩散程度要大于靠近空气的一端；反之，则为好氧性菌。
三、生理生化实验——细菌鉴定和分类依据
在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白