文档介绍：蛋白酶的盐析沉淀实验报告
班级：生工1005学号：0203100520姓名：朱同辉
实验目的:
掌握使蛋白质胶体溶液保持稳定的因素;
了解蛋白质沉淀的几种方法及其意义；3•掌握测定蛋白酶活力的原理和方法；
班级：生工1005学号：0203100520姓名：朱同辉
实验目的:
掌握使蛋白质胶体溶液保持稳定的因素;
了解蛋白质沉淀的几种方法及其意义；3•掌握测定蛋白酶活力的原理和方法；
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实验原理：
盐析法
在蛋白质溶液中加入少量中性盐，蛋白质溶解度增加，称为盐溶；而加入大量中性盐达一定浓度，蛋白质就会沉淀，称为盐析。
原理：①大量盐加入后，能与蛋白质争夺水分子，去除水膜；
②大量盐能中和蛋白质分子表面电荷，使分子间静电斥力减弱，疏水作用增强，使蛋白质沉淀。
盐析效果：二价离子>一价离子
离子半径小>离子半径大
阳离子：Mg2+>Ca2+>Ba2+>NH4+>Na+>K+>Pb+>Cs+
阴离子：PO43->SO42->Cl->Br->NO3->I->SCN-
蛋白质的溶解度与盐离子强度间的关系可以用Cohn经验式来表示：
logS=卩—KI
盐浓度
s
式中：s—蛋白质的溶解度
I—离子强度
P—常数，与温度和pH有关
Ks—盐析常数，与蛋白质和盐的种类有关其中I根据下式计算：
式中：ci一i离子的浓度（mol/L）
zi一i离子所带的电荷
蛋白酶活力的测定
福林（Folin）试剂在碱性条件下可被酪氨酸还原成兰色化合物，蛋白酶水解酪蛋白产生
酪氨酸，将产物中未被水解的酪蛋白除去后与福林试剂作用，根据显兰色的深浅可以计算出酪氨酸的产生量，从而推断酶活力的大小。
4
蛋白酶液的稀释、酶活测定和计算
K—（卩g），
N—酶液稀释倍数
4—酶反应液为4ml,取出1ml测定，故乘以4
10—反应时间为10min
参考稀释倍数：原酶、饱和度20%,30%,40%,50%,60%,70%的上清液分别为1000,200,150,100,100,100,50倍
实验步骤：
1）蛋白质盐析
分两个大组进行实验，每大组取6只烧杯编号，分别加入50ml蛋白酶液，,,,,（对应20%,30%,40%,50%,60%,70%饱和度），在磁力搅拌器不断搅拌下，将其缓慢加入酶液中，加完后再搅拌5min,使硫酸铵完全溶解。然后静置使蛋白酶沉淀完全。
将含有沉淀的酶液小心倒入离心管中，在天平上称重平衡，用高速冷冻离心机离心于10^,10,000r/min离心20min。
将上层清液倒入量筒记录其体积，并分别测定酶活（u/ml）,即为该酶的溶解度S。
2）蛋白酶活力的测定：
将2%酪蛋白溶液40°C预热3-5min
取3支试管编号0、1、2,分别吸取待测酶液1ml放入试管中，40C水浴中预热1-2min
***醋酸2ml,再往3支试管中加入2%酪蛋白1ml，计时摇匀，40C反应
10min
往1、