生物化学水杨酸比色定糖法.ppt

文档介绍：实验一 3,5 —二硝基水杨酸比色定糖法目的和要求? 3,5 —二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。?,5 —二硝基水杨酸定糖法测定样品中的总糖及还原糖。实验原理? 3,5---- 二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内,还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系, 利用比色法可测知样品的含糖量。?该方法是半微量测糖法,操作简便,快速, 杂质干扰较小。实验步骤?一、葡萄糖标准曲线的绘制取9支大试管,分别按下表顺序加入各种试剂: 将上述各管溶液混匀后,用 721 型分光光度计(520 nm )进行比色测定,用空白管溶液调零点,记录光密度值。以葡萄糖浓度为横坐标, 光密度值为纵坐标绘制出标准曲线。二、样品中总糖和还原糖含量的测定?:准确称取1g样品,放入50或100 ml 烧杯内,加入 85%乙醇 30 ml ,混匀,在 50℃恒温水浴中保温 30 min ,过滤,滤渣再用 85%乙醇提取二次。将滤液合并,蒸去乙醇,加少量水,移入 50 ml 容量瓶中,用水定容,备用。?:准确称取样品 1g, 放入大试管中,加入 1 ml 6mol/L 盐酸和 15 ml 蒸馏水。混匀,在沸水浴中加热半小时后, 用碘化钾-碘溶液检查水解程度,若已水解完全,则不呈现蓝色。冷却后加入酚酞指示剂1滴。以 10%氢氧化钠中和至溶液呈微红色。过滤并定容至 100 ml 。再精确吸取上述溶液 10 ml ,放入 100 ml 容量瓶中,定容,备用。?:取 7支大试管,分别按下表加入各种试剂: 将各管混匀后,按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度,在标准曲线上查出相应的还原糖含量,按下述公式推算出山芋粉内还原糖与总糖的百分含量。 100 %???样品重量样品稀释倍数还原糖毫克数还原糖 100 %???样品重量样品稀释倍数水解后还原糖毫克数总糖量思考题??方法的基本原理是什么? ? 型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么? ?? ??