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-可见分光分析法中杂色光的同时,时间分辨荧光免疫〔TRF〕分析法之所以能够成为一种更新,更灵敏的检测方法,主要取决于标记稀土离子的独特的荧光光谱特性,激发谱宽,STOKES位移大,荧光寿命长,通过采用高灵敏的时间分辨荧光分辨技术经延时,门宽选择,排除背景荧光的干扰,极提高信嗓比。此项分析技术具有灵敏度高,稳定性好,线性围宽,标记物制备简便,有效期长,不污染环境,操作简单,应用围广等优点,是取代酶标放免的最正确免疫分析先进技术。
2 ELISA 与TRFIA检测方法的比较
对乙肝两对半的定量测定(TRFIA)和定性酶标测定(ELISA)的研究说明,两种方法对HBs-Ag,HBs-Ab,HBe-Ag,HBc-Ab的阳性检出率差异不明显,无统计学意义(P>);TRFIA法的HBe-Ab的阳性率差异高于ELISA法,有统计学意义(P<);两者均可满足对乙肝两对半5项指标的检测要求。ELISA用于预防性筛查乙肝,可定性检测HBV,而TRFIA技术灵敏度高、稳定性好、特异性高、动态围宽,用于乙肝患者临床诊断、观察疗效等方面,可提供动态数据指导临床接种乙肝疫苗,是理想的定量检测方法。"乙肝两对半〞的检测结果意义在于反映机体感染HBV后免疫应答结果。
3样本采集与处理的影响

标本及混有红细胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔不易洗净,残留在孔的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性,催化底物显色造成假阳性,〔因此〕严重溶血标本禁用。
3. 2相关报道显示样品的存放时间直接影响结果的准确性,室温下保存的血清标本
HBsAb从第5天、HBeAg从第7天、HBsAg从第9天开场就发生显著变化〕〔p<〕;4~8℃下保存的血清标本HBsAb从第7天、HBsAg从第14天开场发生显著变化〔p<〕,于-80℃低温保存的血清样本HBV血清标记物可在4个月稳定保存〔p>〕;采集的样品应及时进展检测,可防止因存放过久的检验误差。
,正常血液采集后1/2~2h开场凝固,18~24h完全血块完全收缩
在工作中,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开场凝固时即强行离心别离血清,使血清中仍残留局部纤维蛋白原,在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白血块或附着在酶标板孔壁使酶标记物不易洗掉,易造成假阳〔阴〕性结果;因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再别离血清,或标本采集时用带别离胶的采血管或于采血管中参加适当的促凝剂。
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