文档介绍：1 选修 3 知识点复****试卷专题 1 基因工程(一)基因工程又叫或。原理是, 操作水平是分子水平。优点: 打破物种界限; 地改造生物的遗传性状。(二)基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——(1 )来源:主要从原核生物中分离纯化出来。(2 )功能:能识别 DNA 分子中特定,使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开(3 )特点:具有性。(4 )结果:经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式: 和。 2.“分子缝合针”——(1) 两种 DNA 连接酶( 和):区别: 前者只能连接黏性末端; 而后者能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。(2)与 DNA 聚合酶作用的异同: DNA 聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的脱氧核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。 DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段的末端,形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——(1) 载体具备的条件:①能够稳定保存并复制;②有一至多个限制酶酶切位点③含有标记基因, 便于。④对受体细胞无害。(2 )最常用的载体是� �质粒, 化学本质是。(3 )其它载体: λ噬菌体的衍生物、动植物病毒(三)基因工程的基本操作程序第一步: 目的基因的获取 1. 目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因。 2. 基因文库包括和。二者的区别: 文库类型文库大小基因中是否有启动子基因中是否有内含子基因多少物种间基因交流小无无某种生物的部分基因可以大有有某种生物的全部基因部分基因可以 3. 人工合成目的基因的两个条件:基因比较小;核苷酸序列已知。 4. 扩增目的基因(1)是多聚酶链式反应的缩写,原理 DNA 双链复制。(2) 过程: 第一步变性: 加热至 90~ 95℃, DNA 解链, 不需要解旋酶; 第二步复性: 冷却到 55~ 60℃, 引物结合到互补 DNA 链。变性和复性利用了 DNA 的热变性原理; 第三步延伸: 加热至 70~ 75℃, 热稳定 DNA 聚合酶从引物起始互补链的合成。 2 第二步: 基因表达载体的组成:除了目的基因外,还必须有等。启动子是 RNA 聚合酶识别和结合的部位, 驱动。标记基因的作用: 是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因, 从而将含有目的基因的细胞出来。常用的标记基因是抗生素基因。第三步: 将目的基因导入受体细胞 1、将目的基因导入植物细胞: 采用最多的是法, 其次还有基因枪法和花粉管通道法等。 2 、将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是法。此方法的受体细胞多是。 3、将目的基因导入微生物细胞: 原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少, 最常用的原核细胞是, 其转化方法是: 先用处理细胞, 使其成为感受态细胞, 再将重组表达载体 DNA 分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合, 在一定的温度下促进感受态细胞吸收 DNA 分子,完成过程。第四步: 目的基因的检测和鉴定 1. 首先要检测转基因生物的染色体 DNA 上是否插入了目的基因,方法是采用。 2. 其次还要检测目的基因是否转录出了 mRNA ,方法是。 3. 最后检测