文档介绍：关于游离DNA提取原理和方法
第一张，共十二张，创建于2022年，星期日
游离DNA介绍
提取原理
提取流程
各缓冲液介绍
第二张，共十二张，创建于2022年，星期日
血中游离DNA简称循环核酸指循环血中游离于细胞关于游离DNA提取原理和方法
第一张，共十二张，创建于2022年，星期日
游离DNA介绍
提取原理
提取流程
各缓冲液介绍
第二张，共十二张，创建于2022年，星期日
血中游离DNA简称循环核酸指循环血中游离于细胞外的部分降解了的机体内源性DNA。
游离DNA大部分都是双链DNA分子，血中游离DN***段远小于基因组DNA，～21kb之间。
疾病的早期诊断，预后，检测。
游离DNA介绍
第三张，共十二张，创建于2022年，星期日
提取DNA总的原则 :
1 保证核酸一级结构的完整性；
2 其他生物大分子的污染应降低到最低程度；
3 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
4 其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
第四张，共十二张，创建于2022年，星期日
方法比较
第五张，共十二张，创建于2022年，星期日
第六张，共十二张，创建于2022年，星期日
破坏红细胞,通常利用红细胞与白细胞膜结构的差异,先使红细胞裂解,经离心后收集白细胞
白细胞裂使膜蛋白和核蛋白变性,游离DNA,通常是采用离子型表面活性剂使蛋白质变性
除去变性蛋白质：通常采用蛋白沉淀剂沉淀变性蛋白质,使DNA留在上清液中
在高盐环境下使DNA从有机溶剂如无水乙醇中析出
原理
本试剂盒采用离心吸附柱和缓冲液系统。样品裂解后，DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐，高PH值时从硅胶膜上洗脱下来 。
第七张，共十二张，创建于2022年，星期日
外周血
细胞裂解
上层溶液
血清
抽提
干燥溶解
离心洗涤
酒精沉淀
DNA溶液
提取流程
第八张，共十二张，创建于2022年，星期日
各缓冲液介绍
第九张，共十二张，创建于2022年，星期日
：十二烷基硫酸钠
-HCl和NaCl：缓冲液
作用：细胞裂解时,调节溶液的PH,维持一定的离子浓度
作用：a. 溶解细胞膜、核膜上脂质成分
，与蛋白质结合成为复合物而沉淀下来
作用：是二价金属螯合剂，使影响DNA的DNA酶中的钙离子和镁离子和EDTA结合,使酶失去活性,有利于提取完整DNA。
K:
作用：能在SDS和EDTA的存在下保持很高的活性，降解蛋白质，将DNA游离
主要试剂介绍
作用：任意比和水相混溶，夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合
第十张，共十二张，创建于2022年，星期日
DNA 以弱碱性的 Tris 或者 TE 溶解。不存在金属离子的干扰，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳定
DNA的保存 ：
吸附柱 ：
结构：
特殊硅基质吸附材料，特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质穿过。
特点：
高盐低pH值结合核酸，低盐高pH值洗脱。
第十一张，共十二张，创建于2022年，星期日
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第十二张，共十二张，创建于2022年，星期日