文档介绍：葡萄糖激酶基因启动子－30位点PCR扩增的实验条件研究
【摘要】为确定pr(聚合酶链反响)扩增葡萄糖激酶基因启动子区，对影响pr的实验因素进展了系统研究。研究结果说明：；以1u酶量效果最满意；最适dntp葡萄糖激酶基因启动子－30位点PCR扩增的实验条件研究
【摘要】为确定pr(聚合酶链反响)扩增葡萄糖激酶基因启动子区，对影响pr的实验因素进展了系统研究。研究结果说明：；以1u酶量效果最满意；最适dntp浓度为167μl/l；最适g2+。以上参数偏离最适条件将会导致实验失败。
【关键词】聚合酶链反响基因扩增条件
聚合酶链反响〔pr〕的开发是用来分析基因失调、恶性疾病和许多感染性疾玻为了防止由于不合适的反响条件导致的错误结果，在一种方法应用于临床常规实验之前要对影响反响结果的因素进展研究。本文就从白细胞中提取的基因组dna作为模板，研究了应用pr方法扩增葡萄糖激酶基因的最适实验条件，以便进而研究其与2型糖尿病发生的关系。现以正常人的基因为对象，报告如下。
1材料和方法
主要仪器：pe9600基因扩增仪；bi-radperpa3000型电泳仪；ini-prteinⅱ型电泳槽及geld1000紫外图像分析系统；tj－6型低温离心机；430ph计；p10,p100微量加样器。
主要试剂：5d260的寡核苷酸引物；100l/l的dntp；低熔点琼脂糖；5u/μl的taq酶。
模板的准备：本文使用的模板是从人体白细胞中应用酚/***仿/异戊醇提取的基因组dna[1]。提取的模板用100μlte缓冲液，60℃加热10－15分钟溶解后，-20℃冰冻保存。
目的片段的扩增：寡核苷酸引物根据文献报道设计：上游引物为5’-aagggattgagtggtaatg-3’，下游引物为5’-gatgtgtttaattag-3’，扩增片段长度为258个碱基。反响体系中模板1μl，10×缓冲液3μl，加双蒸水至30μl条件不变，分别变化taq酶、dntp、引物、g2+的浓度，按94℃预变性5in，后94℃1in，60℃1in，72℃1in进展35个循环，最后72℃延伸5in。用2％琼脂糖凝胶电泳，透射式紫外灯下观察扩增产物片段。
2结果
-2u。～5u之间。
结果说明，均可以扩增出目的dna，产物量之间并无差异，但5u时出现非特异性扩增。为了使以后扩增更加有效，选择taq酶量为1u。
-1μl/l。高浓度的引物可能会引起反响的错配或非特异性产物。其他扩增条件不变的情况下设定系列引物浓度，～1μl/l的浓度之间。结果说明，均有产物扩出，引物二聚体的浓度依次增加，；当到达1μl/l时二聚体明显过剩，产物量反而降低；。
-200μl/l。本项实验dn