文档介绍：高效液相色谱法测定白花蛇舌草中 3,4 作者:马临李俊明陈玉青李燕郭兴杰【摘要】目的建立测定白花蛇舌草中 3, 4- 二羟基苯甲酸甲酯含量的高效液相色谱( HPLC )法。方法采用 ODS 柱(200 mm × mm,5 μ m) ,以甲醇-% 磷酸水溶液(15 ∶ 85, V/V) 为流动相,在 254 nm 波长处检测。 3, 4- 二羟基苯甲酸甲酯浓度在 ~ 50μ g· ml-1 范围内与峰面积呈良好的线性关系(r= 4 );样品的加样回收率为 % ( n=9 );结果精密度及重复性良好, RSD 均不大于 % 。结论该法简便、准确,可以作为对白花蛇舌草药材进行质量控制的一种定量。【关键词】高效液相色谱法白花蛇舌草 3, 4- 二羟基苯甲酸甲酯白花蛇舌草为茜草科耳草属植物白花蛇舌草 Hedyotis diffusa R及 13C-NMR 鉴定结构,HPLC 面积归一化法测定含量大于 %;不同产地的白花蛇舌草药材,从各地药材市场购买,经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为白花蛇舌草 Hedyotis diffusa ODS 柱(200 mm × mm,5 μ m) ;流动相为甲醇-% 磷酸水溶液(15 ∶ 85) ,流速 ml· min-1 ;检测波长 254 nm ;柱温为室温;进样量 20μl 。对照品和供试品溶液的色谱图见图 1~ 2 。由图 2 可见, 3, 4- 二羟基苯甲酸甲酯峰与相邻峰达到了完全分离。以 3, 4- 二羟基苯甲酸甲酯计算理论板数不低于 8 000 。图 1 对照品色谱图(略) 图 2 供试品色谱图(略) 线性关系的考察精密吸取对照品储备液 , ,1, 2,3,5 ml ,分别置于 10 ml 量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。取 20μ l 注入液相色谱仪中,记录峰面积;以浓度( C,μ g· ml-1) 为横坐标,峰面积( A )为纵坐标,进行线性回归,得回归方程为 A= × 104C- × 104(n=6) ,相关系数 r= 4 ,表明本品在 ~ 50μ g· ml-1 范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。 精密度实验取同一供试品溶液,连续进样 6 次,记录峰面积, RSD 为 % ,表明方法精密度良好。 重复性实验取同一产地白花蛇舌草药材,按“ ”项下方法制备 6 份供试品溶液,测定含量,其平均值为 μ g· g-1 , RSD 为 %,结果表明方法重复性良好。 稳定性实验将供试品溶液室温放置,分别于 0, 1, 2, 4, 8, 12h 进样分析,记录峰面积, RSD 为 %,表明供试品溶液至少在 12h 内稳定。 回收率实验取同一产地已知含量的白花蛇舌草药材粉末 g (过 40 目筛) 9 份,精密称定,分别精密加入一定体积(分别为 , , , , , , , , ml )的对照品贮备液( 100 μg· ml-1 ),按“ ”项下方法操作制备供试液,在上述色谱条件下进行测定,本法平均回收率为 % , R