文档介绍：14-2细胞免疫检测技术
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物：
PHA ------T细胞
ConA -------T细胞
PWM14-2细胞免疫检测技术
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物：
PHA ------T细胞
ConA -------T细胞
PWM -------T、 B细胞
LPS -------B细胞
特异性刺激物：
异种抗原
同种组织抗原
3. 检测方法
形态法：刺激物 淋巴细胞（4-6天） 母细胞化
同位素法：PHA 淋巴细胞（54h）
DNA合成期 + 3HTdR掺入
收集细胞
 
检测β射线
测定细胞内的3H－TdR
方法学评价：
优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。
缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。
（1）形态学检查法
（2）3H-TdR掺入法
优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。
缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。
(二) T细胞分泌功能测定
体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。
（三）T细胞介导的细胞毒试验
：
靶细胞抗原
T细胞
观察杀伤活力
致敏CTL
靶细胞
形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞
同位素法 ：淋巴细胞（CTL）+含51Cr 的肿瘤细胞
肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线
意义：
肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力
(四) 体内试验
特异性抗原皮肤试验
PHA皮肤试验
二、B细胞功能检测
B细胞增殖能力的试验
溶血空斑试验
B细胞抗体形成功能的检测
体内试验
(一)B细胞增殖能力的试验
抗IgM
细菌脂多糖
SAC的SPA
B细胞增殖
形态学
3H－TdR掺入法
(二) 溶血空斑试验
1. 原理：
(三) B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法
：
2．应用与方法学评价：
该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。
优点：
稳定、特异、抗原用量少；
可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
(四) 体内试验
体内抗体产生的特异性抗原有白喉类***、破伤风类***、多价肺炎链球菌菌苗等。
将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。
染色计数
离心取上清
测LDH或AKP
离心取沉淀
测活细胞荧光
测发光强度
测CPM值
形态法
酶释法
荧光法
同位素法
化学发光法
三、NK细胞活性测定
靶细胞溶解
常用靶细胞: K562细胞株
第三节 吞噬细胞功能检测技术
吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内杀灭作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。
一、中性粒细胞功能检测技术
二、巨噬细胞功能检测技术
一、中性粒细胞功能的检测
细胞趋化功能的检测
吞噬和杀菌功能的检测
(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
琼脂糖平板法
滤膜渗透法（Boyden 小室法）
(二)吞噬和杀菌功能测定
1．显微镜检查法：
2. 溶菌法
3．NBT还原试验
二、巨噬细胞功能检测
(一)炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。
(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用