核酸检测技术.ppt

文档介绍：关于核酸检测技术
第一张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
核酸检测技术
直接对动植物有害生物基因序列和结构进行测定。
核酸的分离纯化
PCR技术
核酸杂交技术
第二张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
四十张，创建于2022年，星期六
Denaturation：The target DNA (template) is separated into two stands by heating to 95℃
Primer annealing: The temperature is reduced to around 55℃ to allow the primers to anneal.
Polymerization (elongation, extension): The temperature is increased to 72℃ for optimal polymerization step which uses up dNTPs and required Mg2+.
The PCR cycle:
Three different steps in each PCR cycle
第二十一张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
PCR的扩增？
第二十二张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
How does PCR work
The first cycle
The second cycle
第二十三张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
How does PCR work
The third cycle
The fourth cycle
第二十四张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
2. PCR的类型
第二十五张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
多重PCR（multiplex PCR）
巢式PCR（nested PCR）
定量PCR（quantitative PCR）
不对称PCR（asymmetric PCR）
反向PCR（inverse PCR）
逆转录PCR（reverse transcription PCR）
Overlap PCR
… …
第二十六张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
PCR using several primer pairs SIMULTANEOUSLY
Typically generates a product band for each primer pair
多重PCR（multiplex PCR）:What
多重PCR（multiplex PCR）
第二十七张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
Multiplex PCR: Why
Detect several genes at once
eg. transgenic plant screen
Internal controls
VERY important
Tells you how well the PCR reaction worked
Reduces “false negatives”
Reduces “false positives”
多重PCR（multiplex PCR）
第二十八张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
Multiplex PCR: How
Same as regular PCR
Care in primer design
Much greater chance of primer-dimers
Much greater chance of artifacts
Annealing temperatures must be close
多重PCR（multiplex PCR）
第二十九张，共一百四十张，创建于2022年，星期六
A Typical Multiplex PCR Reaction
Sterile Water ul
10X PCR Buffer ul
MgCl2 (50mM) ul
dNTP’s (10mM each) ul
Primer1FWD ul
Primer1REV ul
Primer2FWD ul
Primer2REV ul
Primer3FWD ul
Primer3REV ul
DNA Polymerase ul
DNA Templat