核酸检测实验室建立与应用.ppt

文档介绍：核酸检测实验室建立与应用卫生部临检中心深圳市血液中心血液病毒核酸检测联合实验室叶贤林 2017-6-19 2核酸扩增检测实验室的建立人员场地检测方法选择实施方案依据:卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10 号) 2017-6-19 3核酸实验室人员要求资质:经过临检中心 PCR 培训班培训并取得上岗证;通过血站核酸实验室岗前培训考试合格。培训:①无”核酸”的概念形成, ②防污染的概念③良好工作****惯的培养. ④报告的正确发放. 后备人员的培养. 2017-6-19 4 试剂准备区标本制备区扩增区及扩增产物分析区样本离心交接区报告发放区核酸实验场地 2017-6-19 5方法选择: TMA 与PCR TMA PCR 扩增原理模拟自然 DNA 转录成 mRNA 的过程模拟自然 DNA 复制的过程靶目标 RNA DNA 酶 MMLV 逆转录酶及 T7 RNA 聚合酶 DNA 聚合酶反应体系两种酶,两条引物, dNTP , NTP 一种酶,一对引物, dNTP 温度条件恒温( ℃) 循环导热(变性,退火,延伸) 扩增仪器水浴箱或者加热块热循环仪扩增产物 RNA DNA 扩增速度每个循环可以生成 100-1000 个复制物, 在 15-30 分钟内可增加 10 亿倍复制物以2 n扩增, 2~ 3 h 就能将待扩目的基因扩增放大 10 亿倍 2017-6-19 6 TMA 的优点缺点自动化程度高灵敏度高扩增效率高: 10 n不能绝对定量 2017-6-19 7 PCR 的优点缺点易于自动化灵敏度高扩增效率高汇集拆分过程繁琐拆分可减低非反应性比率 2017-6-19 8核酸试剂质控试剂的确认试剂运输过程的控制(温度\条件\时限) 灵敏度的要求内标的要求试剂涵盖的基因型 2017-6-19 9 检测流程(1): 常规筛查合格汇集标本检测流程 2017-6-19 10 检测流程(2): 常规筛查合格单人份标本检测流程