文档介绍：标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]
HSCT细胞培养及鉴定实验报告
HSC-T6大鼠肝星状细胞培养及鉴定实验报告
前言
肝星状细胞(hepaticstellatecelclone公司
小鼠抗a-SMA单克隆抗体
美国SantaCruz公司
小鼠两步法免疫组化试剂盒
KIT9902，Lot#1301319902
福州迈新生物技术开发有限公司
浓缩型DAB试剂盒
DAB0031，Lot#1
福州迈新生物技术开发有限公司
FITC标记山羊抗小鼠二抗
北京中衫金桥有限公司
油红O染色试剂盒
D027
南京建成生物工程有限公司
苏木素染液
福州迈新生物技术开发有限公司
油酸
西安化学试剂厂
中性树胶
中国上海标本模型厂
10%血清完全培养基：10ml的胎牛血清加入90ml的DMEM培养基中，添加1ml的青-链霉素双抗溶液。
：1ml的20mM的油酸加入99ml的完全培养基中。
a-SMA抗体工作液：a-SMA一抗（200μg/ml）取20μl加入到980μl的PBS中。
FITC标记的山羊抗小鼠二抗工作液：FITC标记的山羊抗小鼠二抗（200μg/ml）取20μl加入到980μl的PBS中。
20%DMSO细胞冻存液：2ml的DMSO溶液加入8ml的完全培养基中。
油红O染液：油红O储存液与双蒸水以3:2的比例混合，并用滤纸进行过滤，使用前2h内配制。
-T6细胞培养基本操作方法
细胞传代：观察培养瓶（25cm2）中细胞贴壁融合达90%时，即可进行细胞的传代，操作步骤如下。开启生物安全柜紫外消毒30min，以75%乙醇擦拭台面灭菌，
并预先准备3个细胞培养瓶（25cm2）、15ml离心管、无菌过滤的PBS、%胰酶溶液、完全培养基，取出长满细胞的培养瓶，倒空瓶中的培养基，加入2ml过滤灭菌的PBS缓冲液反复冲洗2遍，倒空PBS缓冲液，%的胰酶溶液，使胰酶溶液平铺在细胞层面上，缓缓摇动细胞培养瓶，待细胞70%脱落时加入1ml的完全培养基终止胰酶的消化作用，并用吸头反复冲洗培养瓶底将未脱落的细胞冲洗下来，转移液体至15ml的离心管中，1800r/min离心5min，小心吸弃离心管中的液体，并用1ml的完全培养基重悬沉淀的细胞，倒置显微镜下观察细胞调整合适的细胞密度接种到培养瓶中,37℃，饱和湿度，5%CO2细胞培养箱中培养，6h后持续观察细胞贴壁状态，待细胞达到50%～70%贴壁融合时倒空瓶中培养基，，继续培养。
细胞冻存：消化、离心、重悬步骤同细胞传代，取1ml的细胞重悬液，加入1ml的20%DMSO的细胞冻存液颠倒混匀，并移至2ml的冻存管中，冻存管中细胞经4℃（20min）、-20℃（20min）的程序降温后，转移至液氮中冻存。
细胞复苏：从液氮中取出冻存的细胞，立刻置于37℃水浴中快速晃动冻存管使细胞快速解冻，倒置显微镜下观察细胞密度并接种到培养瓶中，37℃、饱和湿度、5%CO2细胞培养箱中培养。
-T6细胞a-SMA免疫组化染色
细胞