文档介绍：关于细胞表面分子的检测与分析
第一张，共四十四张，创建于2022年，星期日
流式在细胞表面分子检测中的应用
免疫细胞及其亚群的检测与功能分析
例如：T细胞、B细胞、NK细胞、DC细胞等
血液系统细胞表面标志的研究
例如：急性白
双色分析
1
Isotype
γ1-FITC
γ2a-PE
2
Compensation1
A-FITC
γ2a-PE
3
Compensation2
γ1-FITC
B-PE
4
Sample1,2……
A-FITC
B-PE
三色分析
1
Isotype
γ1-FITC
γ2a-PE
γ1-PC5
2
Compensation1
A-FITC
γ2a-PE
γ1- PC5
3
Compensation2
γ1-FITC
B-PE
γ1- PC5
4
Compensation3
γ1-FITC
γ2a-PE
C-PC5
5
Sample1,2……
A-FITC
B-PE
C-PC5
四色分析
1
Isotype
γ1-FITC
γ2a-PE
γ1-ECD
γ1- PC5
2
Compensation1
A-FITC
γ2a-PE
γ1- ECD
γ1- PC5
3
Compensation2
γ1-FITC
B-PE
γ1- ECD
γ1- PC5
4
Compensation3
γ1-FITC
γ2a-PE
C- ECD
γ1- PC5
5
Compensation4
γ1-FITC
γ2a-PE
γ1- ECD
D-PC5
6
Sample1,2……
A-FITC
B-PE
C-ECD
D-PC5
第十二张，共四十四张，创建于2022年，星期日
注意事项
样本的采集、储存
样本的染色
全血样本的溶血效果
流式实验对照的设置
第十三张，共四十四张，创建于2022年，星期日
样本的采集
手术切除的新鲜标本取材时，要避免出血或组织坏 死。深低温保存，以免组织发生自溶，DNA降解，造成检测结果的误差。
采集静脉血样本时，要避免发生溶血。
收集培养的细胞时，要注意选择消化的方法和试剂。
第十四张，共四十四张，创建于2022年，星期日
样本的储存
原则：时间越短越好
肝素抗凝的外周血和骨髓：室温 ≦72小时
EDTA抗凝的标本：室温 ≦ 24小时
ACD抗凝的外周血：室温 ≦ 72小时
ACD不推荐用作骨髓穿刺液的抗凝
粒细胞、血小板功能检测：即刻检测
单核细胞表面抗原分析： ≦1小时，4℃
嗜酸性粒细胞表面抗原分析： ≦24小时，4℃
淋巴细胞免疫表型与DNA含量的分析： ≦72小时
第十五张，共四十四张，创建于2022年，星期日
样本的染色
影响抗原抗体反应的因素
电解质、反应温度与时间 、PH值（～）
流式抗体的选择
根据流式细胞仪的类型选择抗体
抗体应用级别、滴度和使用量的选择
根据抗原表达量选择抗体
第十六张，共四十四张，创建于2022年，星期日
溶血，即裂解红细胞。它是流式细胞术分析白细胞的先决条件。溶血不好，白细胞群不能很好分开，溶血好坏直接影响检测结果。因此，必须对溶血过程进行严格控制。
全血样本：溶血效果很重要
影响溶血的因素：采血过程
溶血剂的使用
实验操作过程
第十七张，共四十四张，创建于2022年，星期日
第十八张，共四十四张，创建于2022年，星期日
结语
流式细胞术的样本制备没有一个黄金标准
最佳样本制备方法需要根据具体情况独立设定评估
第十九张，共四十四张，创建于2022年，星期日
常用的荧光染料
荧光染料 激发波长 (nm) 发射波长(nm) 用途 颜色
FITC 488 525 免疫荧光 绿色
PE(RD1) 488 575 免疫荧光 橙色
ECD 488 620 免疫荧光 橙红
PeCy5