文档介绍：实验一 硫酸铜标准曲线的制作
一、目的与要求
1、掌握分光光度比色法的基本原理和应用；
2、熟悉标准曲线的意义及掌握制作方法；
3、了解光谱光度法技术的具体内容及应用；
4、了解回归分析法。
吸收光谱分析和散射光谱分析三大类，
与其对应
的仪器列表如下（表 1）：
表 1
光谱光度分析与其对应的仪器
光谱分析类型
对应仪器名称
1、各种摄谱仪
发射光谱
2、火焰光度法
3、原子荧光光谱仪
4、荧光比色计
1、各种光电比色计
吸收光谱
2、各种可见光区及紫外光区分光光度计
3、各种红外光区分光光度计
4、原子吸收分光光度计
1、各种浊度计
散射光谱
2、各种乳光计
3、各种生物光度计
生物体内有许多物质成分含量甚微，
不能用重量分析法或溶量分析法去测定，
而常用比
色法来测定，该法灵敏、迅速、准确，是当前常用的一种定量分析法。
一、比色法原理
比色法是根据溶液颜色深浅的比较来测定物质含量的一种方法，
在原理上应用了有色溶
液对光吸收的物理定律—— Lambert-Beer
定律。
Lambert 定律：
一束单色光线通过一有色溶液后，
由于溶液吸收了一部分光能，
透过光的强度就会减弱。
若溶液的浓度不变，溶液的厚度越大（即在溶液中所经过的途径越长）
。透过光的减弱也越
显著。
若 I 0=光线通过溶液前的强度（入射光强度）
=光线通过溶液后的强度（透过光强度）
b= 溶液的厚度
Ⅰ
Ⅰ。
b
则
①
图
常数 K1的数值随光线的波长和溶液的性质而改变。
Lambert 定律适用于一切溶液 （图 2）。
Beer 氏定律：
一束单色光线通过一有色溶液后，
透过光线强度就会减弱。
若溶液的厚度不变， 则溶液
的浓度越大，透过光线强度减弱就越显著。
若 C=溶液的浓度
Beer 氏定律并非适用于一切溶液，有的溶液若浓度改变，溶质的解离或聚合的程度也
3
随着改变。
若两种溶液是由同一种物质配成，则 k1= k 2，合并①及②式：则得下式：
③
③式中 可用 T 表示， T 称为透光度。
设 A 或 OD称为吸光度 ( 或称光密度或称光密度
) ，则有－ LogT=A（ OD）
A=KCb ④
依照④式，以相同方法配制含有同一种物质的两种不同浓度的溶液，设标准液浓度为
C ，厚度为 b
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，未知液浓度为 C ，厚度为 b ，可