文档介绍：盐酸戊乙奎醚对大鼠缺氧缺糖/复氧复糖海马脑片凋亡相关因子表达
【摘要】目的研究盐酸戊乙奎醚(penehylidinehydrhlride，PH)对大鼠缺氧缺糖/复氧复糖海马脑片的保护作用及机制。方法采用大鼠海马脑片缺氧缺糖/复氧复[2]。我们前期研究说明其对缺血性脑损伤具有保护作用[3]。但详细机制尚不明确，尤其是在海马脑片程度研究PH对缺氧缺糖/复氧复糖后细胞凋亡相关因子aspase-3、Bl-2、Bax等表达的影响鲜有报道。因此，本实验以非选择性受体阻断药盐酸东莨菪碱(splainehydrhlride，S)为对照，通过研究PH对大鼠海马脑片脑缺血/再灌注损伤后凋亡相关因子的表达，讨论PH对脑缺血的保护机制，为拓宽该药临床应用提供理论根据。
1材料和方法
，体重250～300g，由徐州医学院实验动物中心提供。aspase-3抗体、SP试剂盒购自武汉博士德公司，Bl-2和Bax抗体购自美国Santaruz公司。盐酸东莨菪碱购自美国Siga公司，盐酸戊乙奎醚购自成都力思特制药公司。常规人工脑脊液(nASF)的配制(l/L)：Nal125、Kl5、、、、al2·、葡萄糖10。无糖ASF：以蔗糖10l/L代替葡萄糖。无钙ASF：gS410l/L，无al2·H2。以上均调定pH=。
(英国IKLE公司)，KD-Ⅱ型冰冻切片机(浙江金华科迪仪器设备公司)，2300型2孵箱(美国Sheldn公司)，三气培养箱(美国Ther公司)，752分光光度计(上海分析仪器厂)。
***麻醉，断头处死，立即将头浸入0℃的生理盐水中，迅速取脑，浸入预通纯氧饱和的改进人工脑脊液(ASF，4℃)中。别离海马，将海马在组织切片机上切成400μ厚的脑片，然后将脑片移入37℃的nASF。在2孵箱中平衡60in。然后将脑片移入已预先通气(95%N2，5%2)的无葡萄糖ASF，再通入94%N2，5%2，1%2孵箱中37℃孵育90in。取出脑片移入含葡萄糖nASF，2孵箱中37℃孵育60in，造成缺氧缺糖/复氧复糖，模拟人脑缺血再灌注损伤。
：①正常组，②模型(H/R)组，③PH2μl/L(PH2)组，④PH10μl/L(PH10)组,⑤PH50μl/L(PH50)组,⑥S50μl/L(S50)组。③～⑥组分别于缺氧前参加相应剂量的PH，①～②组参加等体积nASF，孵育30in。取①～⑤组孵育液测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;①、②、⑤、⑥组用SP法检测海马A1区aspase-3、Bax、Bl-2的表达。
***腺嘌呤二核苷酸(空白管不加),37℃孵育15in,参加1l/L2,4-,37℃保温15in,。空白管调零点,440n波长处测光密度值。脑片匀浆后离心取上清液测定总LDH，LDH释放率以脑片释放于孵育液中的LDH占总LDH的百分比(LDH%)表示[4]。
%多聚甲醛中固定6h，