文档介绍：基本概念:
百度转基因的定义,收获如下:转基因(icallyModified,简称GM),是指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因,将其转入另一种生物中,使之与另一种生物的基因进行重组,从而产生特定的具有变异遗传性状的物质。利用转基因技术可以改变动植物性状,培育新品种。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品,用于医药、食品等方面。而转基因生物即遗传基因被改造修饰过的生物体,简称GMO(ically anism)。中国科学院遗传与发育研究所研究员朱祯的解释生动而具体:“所有生物的性状都是由基因决定。例如苹果的颜色是红的,它的‘红色’就由一个相应的基因来控制,我们从苹果中分离到控制红颜色的这个基因,然后通过一定的方法或程序,我们把它转移到香蕉中去,使香蕉变成了红色。这个就叫转基因”。“的确,在物种形状改良方面,没有哪种技术比转基因技术更强大,就象信息技术和核巨变技术一样,是迄今为止认知水平最高的一种技术”,中国农业大学李宁院士语速极快的给出了一个肯定性答案。“它可以改造生命、改良物种,如动植物物种的改良—这是它最核心的功能,没有比它更精准、更高效,更强大的,有了这种技术,水稻能生长在盐碱地上。”
溶藻弧菌外膜蛋白OmpU的克隆
与原核表达实验总体思路:
1)菌种的活化
2)BL21感受态细胞的制备
3)弧菌总基因组DNA的提取
4)引物设计
5)基因扩增及检测
6)PCR产物的纯化
7)PET-30a质粒的扩增
8)PET-30a质粒的提取及检测
9)载体质粒、PCR产物的双酶切
10)载体质粒、PCR产物的双酶切产物的纯化
11)载体片段与PCR产物的连接
12)转化及蓝白斑筛选阳性克隆
13)重组蛋白的表达
溶藻弧菌生物学特性
1、菌名与分类地位:
溶藻弧菌(片 brioalginolyticus)属于弧菌科(Vibrionaeeae),弧菌属(Vibrio),是一种革兰氏阴性短杆菌。 1961年由Miyamoto,Nakamura和Takizawaz发现,当时命名为 Oceanomonasalgsnolytica。 1968年Sakazaki将其命名为Vibrioalginolytieus。1971年Baumann等命名为Beneckeaalginolytica。后来证明 Beneckeaalginolytiea和 Vibrioalginolyticus拥有相同的Strain,故后来将其命名为 Vibrioalginolyticos[’]。矶吞rio。zgin。lyti。。s
以前被称做 Vibrioparahaem口lytious(肠炎弧菌)的生物型一2,因为这两种菌在生化和遗传上相当类似。依照其DNA的 G+cmol%为45一47(Tm,Bd)等特性以及外型分类位于  BergeyosManualvolume一的seeti。n5
2、大小形态:
溶藻弧菌为革兰氏阴性短杆菌(弧菌),不产生内抱子;没有荚膜;,。具有端鞭毛(polarflagella),可以在液体培养基中移动;具有侧鞭毛(lateralflagella),能在固体培养基上移动。
3、生长与栖息环境:
溶藻弧菌为兼性厌氧菌,,是一种嗜盐菌(halophilie),因为生长过程必须有Na+离子的存在(2一10%NaCI),在含3%NaCI环境下培养生长最佳。生长温度范围为5一43℃,最适温度为36℃,较喜好温暖的环境,因此夏季的海水中有大量增加的趋势。在沿海及入海口的海水中可以发现其踪迹,也出现在鱼、虾、贝类等海产动物的体表或肠道内,可感染人类,在患者体内也存在。溶藻弧菌广泛分布于世界各地海水及河口处,且数量居海洋弧菌之首
4、致病性:
溶藻弧菌生存于海洋及河口环境,常出现在鱼、虾的体表或肠道内,可引起绸、石斑鱼、草虾、斑节虾、、贝类等海产动物
大黄鱼的疾病,是海水养殖动物的条件致病菌。溶藻弧菌为嗜温菌,其致病多发生在夏季,在水温25一咒℃下容易流行,另外动物体免疫机能下降或环境恶化时也容易发生[51。该弧菌能造成人身体末端的伤口感染,还会造成软组织及耳朵和眼睛感染,在人受伤和免疫力低时可感染人,且以男性居多,大都是从事海洋职业者,会引起中耳炎、外耳炎、结膜炎及败血症,也常引起食物中毒,造成胃肠道感染。溶藻弧菌为人和水生动物共患的病原菌。
外膜蛋白:
外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP)的细胞学功能主要体现在维持外膜蛋白细胞结构完整和功能稳定,并在细胞的物质交换等方面发挥着重要作用。革兰氏阴性细菌的外膜是细胞壁的主要结构,在细菌与宿主的相互关系中发挥了重要的作用。外膜蛋白具有良好的免疫原性,很容易被宿