文档介绍：关于基于基于抗原抗体反应的检测方法
第1页，讲稿共24张，创作于星期日
学****目的 ：
一、掌握抗原-抗体结合反应的特点
二、了解影响抗原-抗体反应的因素
三、学****抗原-抗体反应的基本检测方法
第2页，讲稿共24张，创胞等颗粒性抗原与相应抗体直接反应出现凝集。
沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合后，
在一定条件下出现肉眼可见的沉淀。
补体参与的反应：应用抗体与红细胞表面抗
原结合，激活反应体系中的补体成分，
根据溶血现象判定试验结果。
免疫标记技术：用荧光素、酶、
放射性核素或化学发光物质等标
记抗体或抗原，进行抗原-抗体
反应的检测.
第7页，讲稿共24张，创作于星期日
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单向免疫扩散：
特点：定性半定量
用途：可用于测定血清IgG IgM IgA 和C3等的含量
原理：沉淀环的直径与抗原含量呈正相关
操作：
铺板
↓
打孔
↓
加样
↓
放湿盒
↓
看结果
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双向免疫扩散
用途：鉴定两种抗原是否相同
特点：定性半定量
操作：
铺板
↓
打孔
↓
加样
↓
放湿盒
↓
看结果
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免疫电泳
常用于血清蛋白的组分分析
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在一定量的抗体中，分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成抗原抗体复合物，用浊度计测量反应液体的浊度，并与一系列标准品对照，由此推算样品中的抗原含量。
免疫比浊
原理：抗体浓度（高浓度）固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。
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免疫标记技术：
（1）免疫荧光法
（2）酶免疫测定
（3）放射免疫测定法
（4）化学发光免疫分析
（5）免疫印迹法
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（1）免疫荧光法
优点:特异性高
缺点:检查任一抗原均须制备相应荧光抗体。
间接荧光法
优点:敏感度比直接法高，制备一种荧光素标记的二
抗即可用于多种抗原的检测。
缺点：非特异性反应亦增强。
直接荧光法
荧光素与抗体连接，再与抗原反应（对抗原定性或定位）
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（2）酶免疫测定
将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效 性相结合，借助酶作用于底物的显色反应判定结果。
酶联免疫吸附试验(ELISA)：测定可溶性抗原或抗体。
免疫组化技术：应用标记的抗体与组织或细胞抗原发生反应，结合形态学观察，对组织或细胞表面抗原进行定性、定量、定位。
双抗体夹心法
间接法
酶联免疫斑点实验 ELISPOT
BAS-ELISA（生物素-亲和素系统）
第15页，讲稿共24张，创作于星期日
双抗体夹心法：用于检测特异性抗原。
操作步骤：
用已知抗体包板→ 洗涤→ 封板→ 洗涤→ 加入待检标本→ 洗涤→ 加酶标抗体→ 洗涤→ 加底物显色→ 结果观察
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间接法：用于检测特异性抗体。
基本步骤：用已知抗原包板→洗涤→加入待检抗体→洗涤→加酶标二抗→洗涤→加底物显色→观察结果
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酶联免疫斑点实验
A: 用已知抗原检测分泌特异性
抗原的B细胞：
用已知抗原包被固相载体，B细胞分泌的抗体与之结合，加入酶标记的第二抗体，通过底物显色反应可检测B细胞分泌的特异性抗体。
第18页，讲稿共24张，创作于星期日
B:用抗细胞因子抗体检测细胞分泌的细胞因子：
用抗细胞因子抗体包被固相载体，加入不同来源的细胞，细胞分泌的细胞因子与包被抗体结合，再加入酶标记的抗细胞因子抗体，通过底物显色反应测定结合在固相载体上的细胞因子。
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BAS-ELISA
生物素-亲和素系统
借助所形成的亲和素-生物素-酶复合物追踪生物素标记的抗原或抗体，通过酶催化底物显色，可检出相应抗体或抗原。
原理：生物素与亲和素的高度亲和力、
生物素能与抗体结合
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（3）放射免疫测定法
用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测。该法兼有放射性核素的高灵敏度和抗原-抗体反应的特异性。
（4）化学发光免疫分析
将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗原或抗体，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子）激发下生成激发态中间体，当回复至
稳