文档介绍：几种显微镜的使用
一、实验目的
了解几种光学显微镜的结构、工作原理、主要用途和使用方法;掌握使用普通显微镜提高分辨力的方法。
二、实验原理
(一)基本原理
一般实验室经常使用的光学显微镜都是由物镜、目镜、聚光器和光源组成,普通显微镜它们的放大原理及光路图如右:
,A2B2第二次成像,,F1为O1的前焦点,F2为O2的前焦点
几种光学显微镜
普通光学显微镜
暗视野显微镜
相差显微镜
荧光显微镜
几种光学显微镜
普通光学显微镜也叫复式显微镜,是最简单的显微镜。从构造上可分光学、机械和电子三大系统。,它适于观察一般固定的,有色的透明度较高的标本。
暗视野显微镜是以丁达尔现象为基础设计的,它使用了特殊的聚光器进行斜射照明,被检细胞器因斜射照明发生衍射和反射,照明光线仅照亮被检样品而不进入物镜,使视野背景暗黑,样品明亮的照明方法暗视野显微镜可用增加光照方法增加物体与背景的反差,-。
几种光学显微镜
几种光学显微镜
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以光的干涉现象为基础设计的。它的聚光器用装有环状光栏的聚光器造成的空心光线柱,使直射光(背景) 和衍射光(样品) 分开。同时在物镜的后焦面上装有相位板,使直射光和衍射光发生干涉,把相位差变为可见的振幅差,相位板上装有吸收膜,吸收部分直射(或衍射)光以增加反差,能够看清更加细微的结构。一般用于观察活细胞的细微结构。
几种光学显微镜
以紫外线或蓝紫光照射某些物质,激发其产生荧光的原理为基础设计的,用高发光效率的光源,经过滤光系统得到紫外光(或蓝紫外光),直接照射标本中的自然荧光物质,使其产生自发荧光,再加以镜检。或以荧光染料先对标本进行染色,然后使之在上述光源照射下产生次生荧光,再加以镜检。主要用于观察荧光(或次生荧光)物质在细胞内分布情况,以及测定细胞器的生理活性。
分辨率
分辨率是表征区分两点之间最小距离的能力,其大小与两点之间距离成正比。
分辨率的大小由透镜孔径和入射光波长决定。 R值愈小,分辨能力愈大;分辨率与照明光线的波长成反比。
R=×λ/ .
R:分辨率; λ:照射光线波长; .:物镜数值孔径
如何提高分辨率
2. 放大率
3. 焦点深度
数片孔径(.)也叫镜口率,是物镜和被检样品之间的介质的折射率(n)与物镜所接受的光锥顶角(亦称孔径角)的一半α(半孔径角)正弦的乘积。其公式如:.=n·sinα。物镜的数值孔径愈大,显微镜的能力愈强,数值孔径与分辨率成正比,与焦点深度成反比。
物镜的数值孔径随前透镜直径的减少而增大。显微镜物镜的前透镜口径愈小,数值孔径愈大,放大倍数愈高,价格愈高。
如何提高分辨率