文档介绍：实验五人淋巴细胞的培养2jsp
（三）试剂
NaOH、 酚红
RPMI 1640干粉
小牛血清、青霉素、链霉素
NaHCO3 、L-谷氨酰胺
三蒸水
要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：
一是供给细实验五人淋巴细胞的培养2jsp
（三）试剂
NaOH、 酚红
RPMI 1640干粉
小牛血清、青霉素、链霉素
NaHCO3 、L-谷氨酰胺
三蒸水
要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：
一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度和渗透压的调节。
二是严格控制无菌条件。
注意
四、实验步骤
（一）准备(清洗与灭菌）
（二）合成培养基的配制
1. 1%酚红：
配制 mol/L NaOH 100ml。
称量 1g 酚红于研钵中，取 30 ml mol/L NaOH逐渐加入研钵中，尽量研细，然后过滤。
过滤后的酚红液加三蒸水至 100 ml。
4℃保存。
2. 饱和NaHCO3的配制：
称取 10g 的 NaHCO3 溶于 200 ml 三蒸水中，灭菌后分装于50 ml 试剂瓶。
4℃保存。
3．RPMI 1640 培养液配制：
配制50ml RPMI 1640培养液：
每组称取 RPMI 1640干粉 ，溶于50 ml 的三蒸水。
置于搅拌器上搅拌 20 min，直到液体变为澄清为止。
磁珠
4. RPMI 1640 合成培养基配制：
加入 1%的酚红，通入CO2，使液体变为金黄色，说明培养基完全溶好。
配制好的培养基，用时用饱和 NaHCO3液调节 pH 至 -。
，分装至细胞培养瓶中。
瓶口封好，-20℃或4 ℃贮存。
（三）小牛血清的处理
新买的新生小牛血清一定要灭活。
将买来的新生小牛血清不开封置于水浴锅中56℃，30min，期间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。
处理后的血清贮存于4℃。
（四）生长培养基的配制
1．双抗： （100000U/ml）
160万单位青霉素/瓶+8ml 3DW = 20万单位/ml
1g链霉素+5ml 3DW = 200000 μg /ml
各取以上的液体5ml混合，使其浓度为10万单位/ml， ，-20℃贮存。
2．谷氨酰胺储备液（200mmol/L）：
（30 mg/ml= 200 mmol/L),。
-20℃贮存。
3. RPMI 1640生长培养基的配制
50毫升
储备液浓度
终浓度
RPMI 1640培养液
—
—
谷氨酰胺
30mg/ml
双抗
100000u/ml
100u/ml
小牛血清
5
—
10%
谢谢欣赏