文档介绍：实验碱性磷酸酶米氏常数的测定
（2）标准管法
CX/AX=CS/AS，已知CS，测定AS、AX，可求得CX。
（3）摩尔吸光系数法
C=A/（为L=1cm，C为1 mol/L时的吸光系数，也称为摩尔吸光系数。
1．722型分光光度计的外形
“方式设定”键（MODE）：用于设置测试方式
“100%T/0ABS”键：%T()或0ABS(零吸光度)
“0%T”键：用于自动调整零透射比
“波长设置”旋钮：用于设置分析波长
① 打开电源开关，使仪器预热20分钟
② 用“波长设置”按钮将波长设置在您将要使用的分析波长位置上
③ 打开样品室盖，将挡光体插入比色皿架，并将其推或拉入光路
④ 盖好样品室盖，按“0%T”键调透射比零
⑤ 取出挡光体，盖好样品室盖，按“100%T”调100%透射比
⑥ 按“方式键”（MODE）将测试方式设置为吸光度方式(A)
⑦ 将参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中
⑧ 打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖
⑨ 将参比溶液推入或拉入光路中，按“100%T”调零A
⑩ 将被测溶液拉入光路中，此时，显示器上所显示是被测样品的吸光度参数
实验完成后，关闭电源，洗净比色皿，并盖好盖布。
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五、操作方法
（一）对硝基苯酚标准曲线的制作
取5支试管编号,0号一支,1－7号各二支,按下表操作：
管 号 0 1 2 3 4 5 6
pNP含量 (mol) 0
mol/mL pNP (mL) 0
H2O (mL)
Na2CO3-NaHCO3 (mL) mL
20 mmol/L MgCl2 (mL) mL
mol/L NaOH (mL) mL
OD 405 nm 
以对硝基苯酚的绝对量(mol数)为横坐标，OD405nm值为纵坐标，绘制标准曲线。求出pNP的克分子消光系数()值。
(二）测定
15支试管，1-5做两组平行测定管，01-05作为空白对照。
No. 1 2 3 4 5
底物终浓度[S] (mM ) 3
10 mmol/L pNPP（mL ）
蒸馏水（mL ） 0
碳酸盐缓冲液（mL ） mL
20 mmol/L MgCl2 （mL ） mL
预热 混匀，37℃，5分钟
酶液（mL ） mL酶液
反应时间 37℃，精确反应10分钟
mol/L NaOH（mL） 各加2 mL
酶液（mL ） mL酶液
OD405
（三） 数据处理
各管在722分光光度