生化实验 蛋白定量分析实验报告.docx

文档介绍：蛋白定量分析实验
实验一 双缩脲法测定蛋白质含量
一．实验目的 掌握双缩脲法定量测定蛋白质含量的原理和标准曲线的绘制。
二．实验原理 在碱性溶液中，具有两个或两个以上肽键的化合物（如蛋白质）可与 Cu2+ 结合生成紫色化合物（双缩脲反蛋白定量分析实验
实验一 双缩脲法测定蛋白质含量
一．实验目的 掌握双缩脲法定量测定蛋白质含量的原理和标准曲线的绘制。
二．实验原理 在碱性溶液中，具有两个或两个以上肽键的化合物（如蛋白质）可与 Cu2+ 结合生成紫色化合物（双缩脲反应），颜色深浅与蛋白质浓度成正比，故可用比 色法测定蛋白质的浓度。在一定条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时 反应，并于520nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白 质浓度。
三．实验仪器及试剂 容量瓶、试管、试管架、恒温水浴槽、吸量管、分光光度计、比色皿
试剂：①标准酪蛋白溶液10mg/ml
双缩脲试剂： CuS04 ・5H2O于100ml水中，加热溶解，取酒
石酸钠10g、碘化钾5g，溶于500ml水中，再加5mol/L NaOH溶液300ml 混合，倒入硫酸铜溶液，加水至1000ml
小鼠肝脏蛋白原浆 四．实验内容
（1）取小试管7支，编号，按下表注入溶液
试剂（ml）
管号
1
2
3
4
5
6
7
标准蛋白质溶液





——

生理盐水







双缩脲试剂







（2） 混匀后，于37°C水浴中保温15min，在520nm波长下比色，以第6管调零 点，测得各管的吸光度值为纵坐标，蛋白质的克数为横坐标，绘成曲线。
（3） 按表中第七管的数据加入溶液，在37C水浴中放置15min,测其吸光度， 根据吸光度值查标准曲线即得出每 100ml 小鼠肝脏蛋白原浆溶液中蛋白质的克 数。

管号
1
2
3
4
5
7
吸光度






绘制曲线如下：
个
y = +
■
-' *
亠+・



""
蛋白质克数/mg、





0
2
6
8
4

光 吸0・6
10
由图可知，， mg,则100ml 小鼠肝脏蛋白原浆液中蛋白质克数为1 . 38 g。
实验二 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
一．实验目的 掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质含量的原理和方法；熟悉紫外分光光 度计的使用。
二．实验原理 考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色，在一定蛋 白质浓度范围内，结合物在595 nm波长下有最大吸收峰，测其光的吸收量即可 得结合蛋白质的量。
三