文档介绍：粗提取与提纯
1、 了解DNA得物理化学性质,理解DNA粗提取以及DNA鉴定得原理。
2、 尝试对植物或动物组织中得DNA进行粗提取及鉴定。
3、 培养实事求就是得科学态度与探索精神。
1、DNA粗提取得选材,思路与鉴定原理
分析:
答:让细胞内浓度大于周围溶液得浓度,细胞会吸水以至胀破
(1)为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？
(2)用玻璃棒搅拌有什么意义？
答:用玻璃棒搅拌可以加速血细胞与细胞核得破裂。注意应沿一个方向快速搅拌,但也不能太快太猛,防止打碎DNA
(3)滤去得就是什么物质？得到得就是什么？
答:过滤将滤去得就是细胞膜与核膜等物质;得到得就是与蛋白质等物质结合在一起得DNA
步骤2、溶解细胞核内得DNA
将***化钠得物质得量浓度为 2 mol／L得溶液40mL加入到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态
步骤3、析出含DNA得粘稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现,注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水,溶液中出现得粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中***化钠得物质得量浓度相当于0、14 mol／L)
讨论:加入蒸馏水得目得？
降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点,使DNA从NaCl溶液中析出
实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于DNA分子得附着与缠绕
注意事项:
步骤4、滤取含DNA得粘稠物
用放有多层纱布得漏斗,过滤步骤3中得溶液至 500mL得烧杯中,含 DNA得粘稠物被留在纱布上
步骤5、将DNA得粘稠物再溶解
取 1个 50 mL烧杯,向烧杯内注入***化钠得物质得量浓度为 2 mol／L得溶液 20mL。用钝头镊子将纱布上得粘稠物夹至***化钠溶液中,用玻璃择不停地搅拌,使粘稠物尽多地溶解于溶液中
步骤6、过滤含有DNA得***化钠溶液
取1个100 mL烧杯,用放有两层纱布得漏斗过滤步骤5中得溶液。取其滤液,DNA溶于滤液中
步骤7、提取含杂质较少得DNA
在上述滤过得溶液中,加入冷却得、酒精得体积分数为 95％得溶液 50mL(使用冷却得酒精,对DNA得凝集效果较佳),并用玻璃棒搅拌,溶液中会出现含杂质较少得丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面得水分。这种丝状物得主要成分就就是DNA
因为DNA不溶于冷酒精,而其她物质可以溶解在酒精中,使含杂质较少得DNA丝状物可以析出,悬浮于溶液中
讨论:
(2)观察丝状物呈什么颜色？
白色
(1)为什么要加50mL得冷酒精？
步骤8、 DNA得鉴定
取两支20 mL得试管,各加入***化钠得物质得量浓度为0、015 mol／L得溶液5 mL,将丝状物放入其中一支试管中,
用玻璃棒搅拌,使丝状
物溶解。然后,向两支
试管中各加入4mlL得
二苯***试剂。混合均匀
后,将试管置于沸水中
加热 5 min,待试管冷
却后,观察并且比较两
支试管中溶液颜色得变化
讨论:
答:有丝状物得试管变成蓝色,另一试管还就是原来颜色
(2)这一鉴定结果说明什么问题？
(1)比较两个试管中溶液得颜色有什么不同？
答:提取出得丝状物就是DNA
(3) DNA得直径约为20×10-10 m,实验中出现得丝状物得粗细就是否表示1个DNA分子直径得大小？
答: DNA分子直径只有2 nm。丝状物就是多个DNA子聚在一起形成得
答:整个实验共
第1次: 步骤1、细胞吸水胀破
第2次: 步骤3、使 DNA黏稠物析出
此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤？几次析出？几次搅拌？分别在哪一步？
【实验总结】
两次蒸馏水:
三次过滤:
两次析出:
六次搅拌:
两次蒸馏水:
过滤时使用得纱布层数与需用滤液或黏稠物有关,第二次要用其滤出得黏稠物有关,所以要使用多层纱布,第一次与第三次均要用其滤液,使用得纱布为1－2层
三次过滤:
第1次:步骤1、 DNA存在于滤液里
第2次:步骤4、 DNA被留在纱布上
第3次:步骤6、 DNA存在于滤液里
两次析出:
第1次: 步骤3、用0、14 mol／L 得NaCI溶液
(含杂质多)
第2次: 步骤7、用冷却得95％得酒精
六次搅拌:
其中除第8步外,其余均要朝一个方向搅拌,在第三、五步搅动还要轻缓,玻璃棒不要直插烧杯底部,这样才能保证得到完整得DNA
第1、2、3、5、7步
【思维拓展】
如果以植物(菜花,洋葱)为实验材料,如
何进行DNA得粗提取与鉴定？
植物细胞需要
加入一定得
洗