文档介绍：班级：植物 092 姓名：徐炜佳 学号：0901080223
淀粉酶活性的测定
一、争辩背景及目的
酶是高效催化有机体陈代谢各步反响的活性蛋白，几乎全部的生化反响都离不开酶 的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的速在冰浴中彻底冷却。
③ 在试管中各参加 1ml 柠檬酸缓冲液
④ 向两支比照管中各参加 4ml NaOH，以钝化酶的活性
⑤ 将测定管和比照管置于 40℃〔±℃〕恒温水浴中准确保温 15min 再向各管分别参加 40℃下预热的淀粉溶液 2ml，摇匀，马上放入40℃水浴中准确保温 5min 后取出，向两支测定管分别快速参加 4ml NaOH,以终止酶的活性，然后预备下步糖的测定。
两种淀粉酶总活性的测定
取上述酶液 5ml 于 100ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度〔稀释倍数视样品酶活性大小而定，一般为20 倍〕。混合均匀后，取4 支管，注明2 支为比照管，另2 支为测定管，各管参加 1ml 稀释后的酶液及 柠檬酸缓冲液 1ml，以下步骤重复α-淀粉酶测定的第④及第
⑤的操作。
麦芽糖的测定
⑴标准曲线的制作
取 15ml 具塞试管 7 支，编号，分别参加麦芽糖标准液〔1mg/ml)0、、、、、、 毫升，，摇匀后再参加 3，5-二硝基水杨酸 1ml，摇匀，沸水浴中准确保温 5min，取出冷却，用蒸馏水稀释至 15ml，摇匀后用分光光度计于520nm 波长下比色，记录消光值，以消光值为纵坐标，以麦芽糖含量为横坐标绘制标准曲线。
⑵样品的测定
取 15ml 具塞试管 8 支，编号，分别参加步骤 2 和 3 中各管的溶液各 1ml，再参加 3， 5-二硝基水杨酸 1ml，摇匀，沸水浴中准确煮沸 5min，取出冷却，用蒸馏水稀释至 15ml， 摇匀后用分光光度计于 520nm 波长下比色，记录消光值，依据标准曲线进展结果计算。
五、数据整理及计算
麦芽糖标准液
0
浓度 mg/ml
OD520
工程
α(测)
α(测)
α(对)
α(对)
α + β
α + β
α + β α + β
(测)
(测)
(对)
(对)
OD520
平行组数据均值 OD520
样品麦芽糖浓
度 mg/ml
上表中前 4 行数据为试验的原始数据。以表中前两行数据绘制标准曲线〔见下页〕，计算上表中第 4 行数据〔各样品的OD 值〕均值，填入上第5 行中，依据标准曲线的方程，计算第 5 行OD 值所对应的麦芽糖浓度，填入最终一行，如上表。
依据以上的数据整理的结果，结合以下公式计算两种淀粉酶的活性：
a
〔A－A”〕´ 样品稀释总体积
淀粉酶活性〔毫克麦芽糖·克-1鲜重·分钟-1〕=
样品重〔g〕´ 5
a b
〔B－B”〕´ 样品稀释总体积( - + -)淀粉酶活性〔毫克麦芽糖?克-1鲜重·分钟-1〕=
样品重〔g〕´ 5
A——α-淀粉酶测定管中的麦芽糖浓度A’——α-淀