文档介绍：基因工程 ic Engineering
李黄金
Email: lihuangjin@
生命科学与生物制药学院
2009
基因工程课程内容
5
2
3
4
1
6
7
8
9
基因工程概论
分子克隆单元操作
大肠杆菌基因工程
非肠道细菌基因工程
真菌基因工程
昆虫基因工程
高等动物基因工程
高等植物基因工程
蛋白质工程、途径工程
基因工程的操作过程
切
接
转
增
检
第二章分子克隆单元操作
克隆载体
DNA的体外重组(切与接)
目的基因的克隆
转化与扩增(转与增)
转化子的筛选与重组子的鉴定(检)
基因文库与目的基因的克隆
基因工程的三大用途与三大要素?
目的基因的克隆战略:
1、构建感兴趣的生物个体的基因文库
将某生物体的全基因组分段克隆,然后建立合适的筛选模型从基因组文库中挑出含有目的基因的重组克隆
2、利用PCR扩增技术或化学合成法体外直接合成目的基因,然后将之克隆表达。
基因文库与目的基因的克隆
D PCR法
C cDNA法
B 鸟枪法
E 化学合成法
A 基因文库的构建
A 基因文库的构建
基因文库的基本概念
基因文库的构建程序
基因组文库重组克隆的排序
基因文库与目的基因的克隆
基因组(Genome):
含有一个生物体生长、发育、繁殖和活动所需要的全部遗传信息的整套核酸。
病毒/噬菌体:单链/双联、DNA/RNA
原核:染色体DNA和质粒DNA
真核:染色体DNA、线粒体DNA、质体DNA
环境样品中的细菌和真菌的基因组总和,包含了可培养的和不可培养的微生物的基因。
宏基因组(Metagenome):
基因文库的基本概念
基因库与基因文库
基因库(gene pool)
特定生物体全基因组的集合(天然存在)
基因文库(gene library or gene bank)
包含特定生物个体或特定环境样品全部基因的克隆集合(人工构建)。
基因组文库(含有全部基因)
根据构建方法的不同,基因文库分为:
cDNA文库(含有全部蛋白质编码的结构基因)
基因文库的基本概念
基因文库构建的基本策略
用鸟枪法构建基因组文库或宏基因组文库,材料来自染色体DNA
用cDNA法构建cDNA文库,材料来自mRNA
在高度分化的生物体中,不同组织和细胞在不同时段的mRNA
种类不同(即基因的表达谱不同),因此同种生物体的cDNA文库
一般还有组织细胞的界定,如肝组织cDNA文库或胚胎组织cDNA
文库等。很显然, cDNA文库的信息量远小于基因组文库