文档介绍：血红蛋白的凝胶过滤
Gel Filtration
凝胶排阻层析(gel exclusion chromatography)
分子筛层析( molecular sieve chromatography)
凝胶过滤(gel filtration)
凝胶层析技术及原理
凝胶:是胶体溶液凝固而成的固体物质,其内部是立体的网状结构.
交联葡聚糖(sephadex)
琼脂糖凝胶(sepharose)
聚丙烯酰胺凝胶(BIO-Gel P)
硅胶(Silicon dioxide or Silica gel)
葡聚糖
分子筛凝胶是一种不带电的具有三维空间的多孔网状结构的物质,每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致,小分子可以进入凝胶网孔,而大分子则排阻于颗粒之外。
凝胶层析(Gel chromatography): 
凝胶过滤柱层析所用的基质是具有立体网状结构、筛孔直径一致,且呈珠状颗粒的物质。这种物质可以完全或部分排阻某些大分子化合物于筛孔之外,而对某些小分子化合物则不能排阻,但可让其在筛孔中自由扩散、渗透。任何一种被分离的化合物被凝胶筛孔排阻的程度可用分配系数 Kav (被分离化合物在内水和外水体积中的比例关系)表示。 Kav 值的大小与凝胶床的总体积( Vt )、外水体积( Vo )及分离物本身的洗脱体积( Ve )有关,即:
Kav= (Ve-Vo)/(Vt-Vo)
在限定的层析条件下, Vt 和 Vo 都是恒定值,而 Ve 值却是随着分离物分子量的变化而变化的。分离物分子量大, Kav 值小;反之,则 Kav 值增大。因此,在同一凝胶柱上分离分子量不同的物质时,由于流动相的作用,这些分离物质将发生排阻和扩散效应。若缓冲液连续地倾入柱中,柱中物质的排阻和扩散效应也将连续地发生,其最终结果是分子量大的物质先从柱中流出,分子量小的物质则后从柱中流出。流出物用部分收集器分管等量或等时地收集起来,检测后分段合并相同组分的各管流出物,即等于把分子量不同的物质相互分离开
常用的色谱分离方法
一. 按两相所处的状态分类
气相色谱法:气固色谱法,气液色谱法
液相色谱法:液固色谱法,液液色谱法
柱色谱法
纸色谱法
薄层色谱法
凝胶过滤技术特点
凝胶过滤的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。
凝胶层析的应用
⑴脱盐:高分子(如蛋白质、核酸、多糖等)溶液中的低分子量杂质,可以用凝胶层析法除去,这一操作称为脱盐。
⑵用于分离提纯:凝胶层析法已广泛用于酶、蛋白质、氨基酸、多糖、激素、生物碱等物质的分离提纯。
⑶测定高分子物质的分子量
⑷高分子溶液的浓缩