文档介绍：无菌操作技术
无菌操作技术
无菌：在科学研究和生产实践中使用的微生物必须是单一的纯种或菌株，不能存在杂菌（非目的菌）。
无菌操作
防止微生物进入机体或物体的方法
在微生物操作过程中，除了使用的容器、用具（试管、烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配置日期。
实验步骤
：，121℃，20min高压蒸汽灭菌。
：将灭菌的试管培养基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多）将试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一般为宜。
：将灭菌培养基放在37℃的温室中培养24~48h，以检查灭菌是否彻底。
实验步骤
二、无菌试验
分别在两套平板的底部划分出四个小区，并在其边缘上写上自己的名字和日期，在四个小区内分别标明待接种的样品名称，为了不影响观察，可用符号或数字代表。在另外两套平板的底部，用记号笔写上姓名、日期以及“空气1”和“空气2”。
手指表面：在火焰旁，半开皿盖，用洗前的手指在平板的A区域轻轻按一下，迅速盖上皿盖。然后用肥皂洗手两次，自然干燥后，在B区轻轻按一下，迅速盖上皿盖。
实验步骤
①将标有“空气1”的平板在实验室打开皿盖，使琼脂培养基表面完全暴露在空气中；将另一个标有“空气2”的平板放在已灭菌的无菌操作箱（室）内，打开皿盖，1h后盖上两个皿盖。
②取出灭菌湿棉签，在实验台面擦拭约2cm2的范围，然后将棉签从平板的开启出伸进平板表面，在E区滚动一下，立即闭合皿盖，放回棉签。用同样的方法将擦拭了门旋钮的棉签在F区进行滚动接种，将沾有灰尘的棉签在G区接种。将灭菌棉签在H区接种。
实验步骤
将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，置37℃培养1~2d。
实验步骤
三、接种
（一）、用接种环转接菌种
（接菌）、B（接无菌水）、C（非无菌操作）和3支液体培养基为D（接菌）、E（接无菌水）和F（不接种）。
，右手持接种环，将接种环进行火焰灼烧灭菌(烧至发红），然后在火焰旁打开斜面培养物的试管帽（管帽不能放在桌上），并将管口在火焰上烧一下。
实验步骤
，将接种环轻轻插入斜面培养物试管的上半部（此时不要接触斜面培养物），至少冷却5s后，挑取少许培养物（菌苔）后，再烧一下管口，盖上管帽并将其放回试管架中。
实验步骤
，在火焰旁取下管帽，管口在火焰上烧一下，将沾有少量菌苔的接种环迅速放进A管斜面的底部（接种环不要碰到试管口边）并从下至上划一直线，然后再从其底部开始向上作蛇形划线接种。完毕后，同样烧一下管口，盖上管帽，将接种环在火焰上灼烧后放回原处。如果是向盛有液体培养基的试管和三角烧瓶中接种，则应将挑有菌苔的接种环首先在液体表面的管内壁上轻轻摩擦，使菌体分散从环上脱开，进入液体培养基中。
实验步骤
，同样划线接种。
：在无酒精灯或煤气灯的条件下，用未经灭菌的接种环从另一盛有无菌水的试管中取一环水划线接种到C管中。
上述无菌操作技术也可将待接和被接的2支试管同时拿在左手上进行。
实验步骤
（二）、用吸管转接菌液
（不要溅到管口或管帽上），暂放回试管架上。
，将其插入吸气器下端，然后按无菌操作要求，将吸管插入已摇匀的菌液中，。
，将用过的吸管放入废物筒中。筒底必须垫有泡沫塑料等软垫，以防吸管嘴破损。
，。
在使用吸管操作过程中，手指不要接触其下端。
实验步骤
五、细菌制片及简单染色
取一块载玻片，用记号笔平均分为两个区域并标记；各滴一小滴生理盐水于两个区域中央；用接种环无菌操作分别由枯草芽孢杆菌营养琼脂斜面和金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面挑取适量菌苔，将沾有菌苔的接种环置于载玻片的生理盐水中涂抹，使菌悬液在载玻片上形成均匀薄膜。若用液体培养基涂片，可用接种环蘸取1~2环菌液直接涂于载玻片上。
实验步骤
自然干燥或用电吹风干燥。
涂菌面朝上，通过火焰2~3次。
将载玻片平放于载玻片支架上，滴加染液覆盖涂菌部位即可，，草酸铵结晶紫染液或齐氏