文档介绍：信号序列(signal sequence)
◆研究过程
●1960s ,e Palade 示踪技术研究培养细胞中蛋白质的分泌
●Redman和Sabatini用分离的RER小泡研究膜结合核糖体合成的蛋白质去向
●1971年美国洛克菲勒大学的Blobel等提出了信号序列(signal sequence)的概念。
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同位素示踪:分泌途径研究
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蛋白质进入核糖体实验
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◆信号序列的间接证据
1972年, Milstein 和他的同事发现:
●从细胞质分离的IgG轻链:
多20个氨基酸残基
●释放到细胞外的IgG轻链:
少20个氨基酸残基
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◆信号肽的证实
:
●RER对产物的影响
●蛋白水解酶实验
●多聚核糖体的离体翻译
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体外合成实验
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多聚核糖体实验
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信号肽的特性
◆序列特征
15-35个氨基酸残基,其中含有4-12个疏水残基
◆特异性:
◆位置:
●N-端突出的一段肽
●内含信号肽。
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早期信号假说(signal hypothesis)
1975年,Blobel等正式提出了信号假说,要点是:
◆合成始于游离核糖体;
◆N端信号序列靠自由碰撞与内质网膜接触,然后插入内质网的膜;
◆蛋白质以袢环形式穿过内质网的膜;
◆蛋白的存在方式:
●若信号序列被信号肽酶切除:完全进入腔
●若是停止转移信号: 膜蛋白
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信号识别颗粒与停靠蛋白
◆signal recognition partical, SRP
●SRP is a cytosolic ribonucleoprotein particle
● Six discrete polypeptides
● A 300-nucleotide RNA
●三个功能域:
▲翻译暂停结构域(P9/P14)
▲信号肽识别结合位点(P54)
▲SRP受体蛋白结合位点(P68/P72)。
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