文档介绍：
基本步骤
一、目的基因的获取
二、基因表达载体的构建
三、将目的基因导入受体细胞
四、目的基因的检测与鉴定
一、目的基因的获取
(一)、目的基因
目的基因主要指能编码蛋白质的基因,例如,与生物抗逆性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因等,也可以是一些具有调控作用的因子。
基因结构:原核生物基因与真核生物基因在结构上都有编码区和非编码区。
编码区:是编码具有一定氨基酸序列的蛋白质的序列。
非编码区:分布于编码区两侧,对于编码区编码蛋白质具有调控作用。
原核生物基因---编码区连续

真核生物基因---编码区不连续
外显子与内含子的认识:
(二)、获取目的基因的方法

(1)基因文库:将某种生物全部DNA提取出来,选用适当的限制酶,将DNA切成一定范围大小的DN***段,分别与载体连接,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。
(2)种类:基因组文库:这个受体菌的群体包含了这种生物的所有基因,称
为基因组文库。
部分基因文库:部分受体菌所含有的基因只是该种生物的部分基
因,称为基因组文库。如cDNA文库。
两种文库的比较
基因文库类型
部分(cDNA)文库
基因组文库
构建基因文库
的过程
某种生物某个时期的mRNA
逆转录
cDNA
与载体连接导入

受体菌群体
某生物内部全部DNA
限制酶
许多DN***段
与载体连接导入
受体菌群体
文库大小
小
大
基因中启动子
无
有
基因中内含子
无
有
基因多少
某种生物的部分基因
某种生物的全部基因
物种间的基因交流
可以
部分基因可以
(3)从基因文库中获取目的基因的主要依据
可根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA、基因的翻译产物蛋白质等特性来获取目的基因。
获取目的基因的途径
从供体细胞的DNA中直接分离。方法:鸟枪法。
鸟枪法:供体的DNA切成许多DN***段,连入载
体导入受体细胞,根据性状筛选目的