文档介绍：实验一、质粒DNA的提取及检测
【实验目的】
1、 掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤
2、 掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术
3、 学会PCR操作的基本技术
第一部分质粒DNA的提取
一、 实验原理：
碱裂解法提取质粒实验一、质粒DNA的提取及检测
【实验目的】
1、 掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤
2、 掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术
3、 学会PCR操作的基本技术
第一部分质粒DNA的提取
一、 实验原理：
碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差 异来分离它们。〜，线性的DNA双螺旋结构解开 而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此 相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。， 共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染 色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状 结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下 来而被除去。
二、 仪器与试剂
1、 仪器 恒温摇床、台式离心机
2、 试剂 溶液I、溶液II、溶液III、无水乙醇、TE缓冲液、胰RNA酶、酚、氯仿
三、 实验步骤
1、 将2mL含相应抗生素（Amp:50gg/mL）的LB液体培养基加入到试管中，接入含pUC19 质粒的大肠杆菌，37°C振荡培养过夜。
2、 ，4000r/min离心2min。
3、 吸去培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。
4、 将细菌沉淀悬浮于100gL溶液I中，充分混匀，室温放置10 min。
5、 加200gL溶液1（新鲜配制），盖紧管皿，混匀内容物，将离心管放冰上5min。
6、 加入150应溶液I （冰上预冷），盖紧管口，颠倒数次使混匀。冰上放置15min。
7、 12000r/min，离心15min，将上清转至另一离心管中。
8、 向上清中加入等体积酚：氯仿（1： 1）（去蛋白），反复混匀，12000r/min，离心5min， 将上清转移到另一离心管中。
9、 向上清加入2倍体积无水乙醇，混匀后，室温放置5〜10min。12000r/min，离心5min。 倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。
10、 用1mL70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或空气中干 燥。
11、 加20gLTE缓冲液，其中含有20gg/mL的胰RNA酶，使DNA完全溶解，-20C保存。
第二部分琼脂糖凝胶电泳检测DNA
一、 实验原理：
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应°DNA分子在高于等电点的 pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数 量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。在一定 的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。 具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。DNA分子的迁移速 度与相对分子质量的对数值成