文档介绍：医学
分子生物学
7/8/2017
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第一章蛋白质的分离纯化
生命大分子物质的特点:
1、生命大分子是动物、植物和微生物在进行新陈代谢时所产生的活性物质
2、生命大分子的特殊性和复杂性
3、生命大分子都是由简单的小分子构成的物
4、具有特殊的结构和功能
5、生命大分子不稳定
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材料的选择与处理
材料的选择
有效成分:欲纯化的某种单一的生命大分子物质。相对于有效成分以外的物质称杂质。
材料来源
动物
植物根、茎、叶
微生物
组织、器官
血液、分泌物
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选材原则:
①含有效成分丰富、稳定性好;
②来源丰富、保持新鲜;
③材料适合加工提取;
④具有经济利用价值。
组织差异性
时间差异性
生理状态差异性
研究对象的选择
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蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合形式存在,每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质。蛋白质的分离(separation,isolation)和纯化(purification)工作是生物化学中一项艰巨而繁重的任务。
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蛋白质纯化的总目标是增加制品的纯度(purity)或比活(specific activity),以增加单位蛋白质重量中所要蛋白质的含量或生物活性(比活常以活力单位数/毫克蛋白质表示)。
分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级分离和细分级分离3步
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(1) 前处理(pretreatment)
分离纯化某一蛋白质,首先要求把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来,并保持原来的天然状态,不丢失生物活性。
动物材料应先剔除结缔组织和脂肪组织。
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种子材料应先去壳甚至去种皮以免受杂质的污染,油料种子最好先用低沸点的有机溶剂如***等脱脂。
然后根据不同的情况,选择适当的方法,将组织和细胞破碎。
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机械破碎法
捣碎法
研磨法
匀浆法
物理破碎法
温度差破碎法
压力差破碎法
超声破碎法
化学破碎法利用化学渗透的方法,通过有机溶剂、抗生素、表面活性剂、金属熬合剂、变性剂等,使细胞膜破碎的方法。
酶促破碎法利用酶的活性破坏细胞膜的化学结构使细胞膜破碎的方法。
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如果所要的蛋白质主要集中在某一细胞组分,如细胞核、染色体、核糖体或可溶性的细胞质等,则可利用差速离心方法将它们分开
在不同离心力场下沉降的细胞器
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