EGCG对人耐药口腔表皮样癌细胞株耐药逆转的实验.doc

文档介绍：EGCG对人耐药口腔表皮样癌细胞株耐药逆转的实验
作者:梁钢,林晓贞,唐安洲,黎莉,周铭
【摘要】目的研究 EGCG对人多药耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒增敏作用及裸鼠移植瘤的抑瘤作用。方法 MTT法检测药物对细胞的毒性作用,流式细胞术分别检测细胞P糖蛋白的表达, HPLC检测细胞内VCR浓度,采用KB和KBV200细胞分别种植同一裸鼠左、右腋下,观察用药后体重、抑瘤率的改变。RTPCR检测瘤组织mdr1的表达。结果 EGCG在100mg·L-1以下剂量对两株肿瘤细胞的抑制率均小于10%,EGCG与VCR联合应用可明显提高VCR的细胞毒作用;EGCG联合VCR作用后KBV200细胞内VCR浓度升高,P糖蛋白的表达下降;EGCG可增加VCR对KBV200的抑瘤作用, 可降低瘤组织MDR1的表达量。结论 EGCG可增强VCR对多药耐药肿瘤细胞KBV200的细胞毒作用,机制可能与降低MDR1mRNA、Pgp表达,提高细胞内药物浓度有关。
【关键词】多药耐药;P糖蛋白;耐药逆转剂;鳞癌
0 引言
口腔癌在世界范围内高发,居头颈部肿瘤第二位,是十大最低患者生存率肿瘤之一,原发多药耐药(Multidrug resistance,MDR)及继发MDR较为严重,常见机制是MDRl、LRP(Lungresistance related protEin,LEP)、MRP1(Multidrug resistance related protEIn,MRP)表达升高,导致相应胞膜或核膜蛋白表达增高[1]。如何解决以鳞癌、肝癌等为代表的实体瘤MDR 问题是当前抗肿瘤研究的热点。目前 MDR逆转剂多数为P糖蛋白(Pgp)功能抑制剂,如维拉帕米(Verapamil,VRP,Ver),临床上的VRP最大耐受浓度为2μmol/L,这一浓度在体外组织培养中不能逆转MDR,限制了临床的使用。到目前为止,二、三代多药耐药逆转剂(Reuersalagents,RRA)尚未成功应用于临床。因此在天然药物中寻找高效、低毒RRA或改造已知RRA的化学结构以降低其毒性是主要研究方向。国内外研究绿茶提取物,特别是EGCG的抗肿瘤和逆转MDR作用,研究集中于逆转机制与MDR1或MRP1的关系,部分结果表明EGCG可通过抑止Pgp功能发挥逆转作用,而部分资料显示其逆转作用独立于Pgp和MRP2,体内实验较缺乏;我们前期已证实EGCG在体外可逆转人MDR肝癌细胞BEL7404/ADR的MDR作用[1]。本研究探讨EGCG体内逆转KBV200的MDR作用,为进一步发现新的多药耐药逆转剂和可能的作用靶点提供实验依据。

1 材料和方法

人口腔表皮样癌细胞株KB和KBV200由北京大学临床肿瘤学院许佐良教授惠赠。BALB/Cnu/nu裸小鼠(4~5周),体重(15 ± 2 )g,雌雄各半,购自上海斯莱克实验动物公司,饲养于SPF条件下。

盐酸长春新碱(VCR)购于上海华联制药有限公司; EGCG按专利1060488A分离得; MTT购自Sigma,RPMI1640、新生牛血清购自GIBCOBRL;抗PgpPE抗体: Becton Dickinson;小量组织总RNA快速抽提纯化试剂盒购自北京华舜;First st