文档介绍：实验六、植物组织中总糖和还原性糖含量的测定
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1、实验目的
掌握总糖和还原糖含量的测定方法
学****总糖和还原糖提取的方法
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2、实验重点和难点
利用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量的实验原理
多糖在酸性加热条件下会降解为还原糖
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3、实验原理
、还原糖的概念
指含有游离的半缩醛(***)基糖。单糖都是还原糖;某些二糖是还原糖(如麦芽糖、乳糖等);多糖多为非还原糖。
葡萄糖分子中含有游离醛基,果糖分子中含有游离***基,乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基,故它们都是还原糖。
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、3,5-二硝基水杨酸比色法
总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
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还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物,3,5-二硝基水杨酸(黄色)则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计,在540nm波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,。
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相对密度法
折光法
旋光法
物理法
、糖含量测定方法
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化学法
还原糖法
碘量法
比色法
直接滴定法
(改良的兰—爱农法)
高锰酸钾法
萨氏法
3,5—二硝基水杨酸
酚—硫酸法
蒽***法
半胱氨酸—咔唑法
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纸色谱
薄层色谱
GC
HPLC
β—半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖
葡萄糖氧化酶测葡萄糖
发酵法——测不可发酵糖
重量法——测果胶、纤维素、膳食纤维素
色谱法
酶法
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4、操作步骤
、制定标准曲线
管号
0
1
2
3
4
5
标准葡萄糖溶液/mL
0
蒸馏水/mL
0
DNS试剂/mL
沸水浴中准确煮沸5min,取出,用自来水冷却至室温
蒸馏水/mL
葡萄糖浓度/mg/mL
0
A540
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