文档介绍：背景
尿酸氧化酶（Urate Oxidase, ）,又称尿酸酶（Uricase）是生物体 内嘌吟降解代谢途径中的一种酶，大部分生物在嘌吟的代谢过程中产生尿 酸，而尿酸酶能催化尿酸氧化为尿囊素。许多物种中均发现有尿酸酶存在尿酸氧化酶柱纯化
实验目的
学****根据蛋白质所带电荷，选择离子交换树脂进行蛋白质的分离纯化。
实验原理
离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷 的称之阴离子交换树脂；而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析可 以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的 pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质， 所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将 吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之 阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质，结合的蛋白可以通过逐步增加洗 脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。
Sepharose是表示以琼脂糖为基质的胶，Sepharose Fast Flow分的DEA E，CM，Q，SP就是在Sepharose分别偶联上 二乙基氨乙基，羧***， 三甲***基，磺丙基，作为弱阴，弱阳，强阴，强阳四种离子交换填料。
实验用品
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填料：DEAE-Sepharose ；核酸蛋白仪；紫外分光光度计；梯度混合仪；
分步收集器
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透析液：20 mmol/L, ， g 硼酸溶于3000 ml蒸馏水。
平衡液：20 mmol/L硼酸盐缓冲液，。
离子交换洗脱液： mol/L NaCl，20 mmol/L硼酸盐缓冲液；2 mol/L NaCl，
20 mmol/L硼酸盐缓冲液（）。
实验方法
将硫酸铵纯化后沉淀用20ml, , 20 mmol/L硼酸盐缓冲溶解，并 透析过夜。透析后测量体积，测OD280及留样1ml。
配制20 mmol/L硼酸盐缓冲液500 ml，。采用上 述溶液平衡层析柱，上样后以0〜 mol/LNaCl，20 mmol/L硼酸盐溶液进 行梯度洗脱，再以2 mol/L NaCl进行柱再生，流速2 ml/min，收集尿酸酶活 力峰。
实验结果
记录透析后体积，OD280
测收集的尿酸酶活力峰的紫外吸收值，并绘制尿酸酶的洗脱曲线。
实验三尿酸氧化酶的鉴定
实验目的
学****通过SDS-PAGE鉴定蛋白质分子量及纯度
实验原理
聚丙烯酰***凝胶是由丙烯酰***（简称Acr）和交联剂N，N’—E***双丙烯 酰***（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶， 并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰***凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电 荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如 果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一 条区带。
SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定 的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有 的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS复合 物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。 这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰***凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。由于 SDS-PAGE可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不 计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样 品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的 蛋白质，那么SDS—PAGE后，就只出现一条蛋白质区带。
实验用品
聚丙烯酰***储液：29 g丙稀酰***，1 g甲叉双丙烯酰***溶于80 ml蒸馏 水，定容至100 ml。
Tris缓冲溶液（1 mmol/L，，积层胶）：于800 gTris
碱，，最后加水定容至1 L。
Tris缓冲溶液（ mmol/L，，分离胶）： gTris碱，，最后加水定容至1 L。
5xTris-甘氨酸电泳缓冲液：在900 gTris和94 g 甘氨酸，然后加入50 ml 10%（m/v）电泳级SDS的贮存液，用去离子水补 至 1000 ml。
6x上样缓冲液：7 ml 4xTris-HCl （， mol/L）， ml 甘油，
1 gSDS，