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真菌感染实验诊断课件.ppt

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真菌感染实验诊断课件.ppt

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真菌感染实验诊断课件.ppt

文档介绍

文档介绍:第三章真菌感染实验诊断
第一节 真菌的基本特性
真菌是一大类具有典型细胞核,不含叶绿素,不分根、茎叶的真核细胞型微生物。
第1页,共53页。
一、真菌的形态特性
(一)单细胞真菌呈圆形,如酵母菌。
(落颜色 病原性真菌颜色淡,
污染真菌颜色深;
④致病性真菌菌落下沉,有时使
培养基开裂;污染性真菌菌落
不下沉,很少引起开裂。
第24页,共53页。
三、真菌的生化反应
用于主要深部感染真菌如假丝酵
母菌、隐球菌等。
(醇)类发酵试验 37℃孵育,
观察糖发酵情况。
第25页,共53页。
含菌生理盐水
与已融化的固体同化碳源培养
基(45℃)混合,然后在培养基
上分别加糖,置25℃孵育观察
结果。若24h后无变化可重复
加糖。如能同化周围有生长圈,
否则无生长。
第26页,共53页。
同化碳源试
验相同,但需用无氮源的培
养基,不要加糖类,而加入
***钾。
第27页,共53页。
四、动物实验
实验的目的是分离病原性真菌、
确定真菌菌种的致病性、研究药物
对真菌的作用等。如假丝酵母菌接
种家兔或小白鼠,肾脏明显肿胀,
肾皮质部位有白色脓疡。
第28页,共53页。
五、核酸检测
医学真菌的鉴定手段引入了分子生
物学的鉴定方法,从核酸碱基G+C
mol%分析、限制性片段长度多态
性(RFLP)、Southern印迹分析到脉
冲场凝胶电泳(PFGE)、PCR指纹、
随机扩增多态性DNA(RAPD)以及DNA
特殊片段测序等。
第29页,共53页。
(一)G+Cmol%分类鉴定法
常用热变性温度法。原理是DNA加热变性使碱
基氢键被打开,双链螺旋变成单链,导致核
苷酸碱基在260nm紫外吸收明显增加,完全
变成单链后,紫外吸收增加停止。紫外吸收
增加的中点值温度为热变性温度(Tm)。
若真菌DNA中G+C碱基对含量多,Tm值就高。
可直接反映G +C碱基对的绝对含量。
计算公式为:G+Cmol%=(Tm-)×
第30页,共53页。
(二)真菌核型的脉冲电泳分析
脉冲凝胶电泳技术(PFGE)解决
了真菌大分子DNA的分离技术难题。
第31页,共53页。
原理:PFGE有两个方向的电场在设
定的脉冲时间里交替变换,使大分
子DNA在移动中不断改变自己的形状
及迁移方向,从而绕过细小的凝胶
孔隙而得以分离。较大的DNA分子泳
动慢些,较小的快些,有许多因素影
响电泳带型,分离真菌等大分子量的
DNA宜用较低电压和较长脉冲时间。
第32页,共53页。
用PFGE分析真菌核型,可直接比较
其遗传背景,从电泳核型差异中进行
分类鉴定,又能取得基因结构的基本
数据,构建出大尺度物理图谱。
第33页,共53页。
(三)随机扩增多态性 DNA(RAPD)分析
RAPD分析是一种利用随机合成的单个
寡核苷酸引物,通过PCR扩增靶细胞
DNA,扩增产物凝胶电泳,分析DNA
片段大小和数量的多态性,从而比
较靶基因差异的一种技术。由于病
原性真菌基因组庞大,RAPD分析适
用于真菌的鉴定与分类。
第34页,共53页。
六、真菌***的检测
真菌产生有毒的代谢产物,可引起急
慢性真菌中毒症,引起消化道中毒症
状,而且可进入人体内引起病变,如
引起肝脏损伤的黄曲霉***、杂色曲
霉***;引起肾脏损害的桔青霉素;
引起中枢神经系统损害的黄绿青霉素
等。甚至有的***具有致癌性,如黄
曲霉***与肝癌发生有关。
第35页,共53页。
检测真菌***有许多方法,如检测
黄曲霉***有生物学方法和ELISA法
等。生物学方法主要用于检测真菌
***的毒性,如用鸡胚、小白鼠作
毒性试验,观察动物中毒死亡或出
现肿瘤。ELISA法操作简便,并具有
安全快速高效、费用低,适用于大
批量标本的筛选。
第36页,共53页。
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