文档介绍：酶联免疫吸附试验 (Enzyme-Linked Immunosorbent Assays, ELISA)
——双抗体夹心法
免疫学三大标记技术
荧光标记技术
酶标记技术:酶联免疫吸附试验(ELISA)
放射性同位素标记技术:放射免疫
ELISA 的发展历程
免疫酶标记技术是继免疫荧光抗体技术和放射免疫分析之后发展起来的一大新型的血清学技术
1966年,Nakane和Avrameas等分别报道用酶代替荧光素标记抗体,建立了酶标抗体技术(enzyme-labelled antibody technique),用于生物组织中抗原的定位和鉴定。
1971年,Engvall ,Van Weemen 等报道了酶联免疫吸附试验,从而建立了酶标抗体的定量检测技术。
20世纪80年代,酶标记抗体检测和鉴定蛋白质分子的免疫转印技术问世,
目前,免疫酶标记技术已成为免疫诊断、检测和分子生物学研究中应用最广泛的免疫学方法之一。
酶联免疫吸附试验(ELISA)
原理:
酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)是一种固相酶免疫测定的方法,目前广泛应用于各种抗原和抗体的检测。其基本原理是将抗原或抗体固定在固相载体表面,并保持其免疫活性,再与酶标记抗体或抗原联结,并保留酶的活性,然后加入酶反应的底物,后者被酶催化变为有色产物,反应颜色的深浅可与相应抗原或抗体的量相关
ELISA反应类型
直接法(双抗体夹心法):测抗原。
间接法:测抗体
竞争法:
桥联法(ABC-ELISA):应用亲和素(Avidin)和生物素(Biotin)的ELISA
双位点一步法:针对抗原分子上两个不同抗原决定簇测定抗原。
。
,则结合为抗原抗体复合物。
,使之与抗原结合,形成抗
体-抗原-酶标记抗体复合物。
(四***联苯***)起显色反应,指示特异性抗原
抗体反应的存在。在一定范围内显色深浅与抗原量成正比
双抗体夹心法示意图
酶
抗体
酶标记
抗体
抗原
抗体
固相载体
,则结合为抗原抗体复合物。
,则结合为抗原-抗体-酶标记抗抗体复合物。
。
。
酶
抗抗体
酶标记
抗抗体
抗体
抗原
固相载体
间接法示意图
。
,则优先竞争结合抗体,结合为抗原抗体复合物。
,抗原没有结合的位点酶标记抗原去占据,则结合为酶标记抗原-抗体复合物。
。
固相载体
抗体
抗原
酶
酶标记抗原
抗原
酶标抗原竞争法示意图
双抗体夹心法
(含待测抗原),使抗原与固相上的抗体结合
,使之与抗原结合。标记的酶可催化底物(四***联苯***)起显色反应,指示特异性抗原抗体反应的存在。在一定范围内显色深浅与抗原量成正比