文档介绍：红细胞渗透脆性试验 与 羊血白细胞染色
药学2班 陈旭宇 李佳朋
讲解内容
实验概述
预实验情况
正式实验情况
创新实验
实验概述
一、实验目的
1、观察不同浓度的低渗盐溶液对红细胞的影响，加深理解细胞外液晶体渗透引起其他异物影响所致溶血。
d. 红细胞脆性实验中，可以先向每个试管中加***化钠然后再加蒸馏水，加的时候还有个小技巧，以***化钠为例，先将几个大于1000uL的试管中都加上1000uL的***化钠，然后再按900,800到100uL递减的顺序依次加这样可以节省时间
，不可沿着管壁。试验中我们直接用的滴管取血，可能试管中的血量有差距，建议后面用微量移液器定量取血排除观察溶血状况时，血量不同带来的影响
，静置及观察时不要移动试管。
，否则染不上色
，防止将血膜冲掉，应用蒸馏水冲血片的上方，然后滑落下的水流冲洗血膜
实验2：细胞染色实验
药品准备：
缓冲液配制：1%KH2PO4+1%NaHPO4(20ml),加水至1000ml，置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染。
姆萨染液配制：药品：吉姆萨染料（粉末）、甲醇 （AR）33ml、甘油（AR）33ml
方法：先将吉姆萨染料放入研钵中，逐渐到甘油研磨溶于甘油中，置于58℃水温箱内90--120min，然后加入甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。
（此染液放置室温阴暗处，时间越长越好）
(2）实验过程
开始时，一切从零开始，我们的血片制备很不合格，要么过厚，要么不均匀。在耿姝学姐手把手讲解之后，我们不耐其烦，连续联系制作了近30个血片，终于能够制作出厚度适宜，效果成功的血涂片，并掌握了制片的技巧。
联系生物实验一中白细胞计数时应用白细胞液破坏红细胞的经验，我们在染色之前对血液使用白细胞稀释液排除干扰，但是染色结果与不加白细胞染色液相比反而较差，影响染色效果。分析原因有可能是白细胞染色液引起了PH的改变，或产生液膜稀释了染液，最后否定了加白细胞稀释液进行染色的方案。
经验总结
推片经验：
用移液枪头沾取羊血点置于载玻片上，呈米粒大小，将推玻片保持与载玻片约30度角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向后滑动，至血膜铺匀。
图1 瑞氏染色法
图2 吉姆萨氏染色法
通过预实验总结出的各染色法染色效果：
瑞氏染色法：白细胞核、细胞浆层次分明，嗜中性白细胞浆中可见淡红色染色颗粒。
吉姆萨氏染色法：白细胞核呈蓝色，层次清楚。
瑞—吉复合染色法：白细胞层次清晰，细胞浆中染色颗粒可见。
正式实验
实验准备：
我们在周三下午将PPT交与李老师征求修改意见，并在当天晚上修改完毕。
于周四晚上，准备好实验所需各项仪器与药品，并写好板书。
周五早上上课前取回羊血。
实验过程：
实验过程无迟到、旷课、早退现象，同学们热情度很高，认真实验。
对同学的操作过程进行严格把关，使绝大多数同学的实验取得了预期的结果，其中章梦甜、陶倩组白细胞染色观察效果非常好，能观察到多个白细胞清晰镜像。
白细胞染色出现问题主要为以下几点：
1、血膜涂得过厚，造成观察困难；
2、对染液进行冲洗时不彻底，造成着色过深，出现一大片蓝的现象；
3、冲洗过猛，观察不到白细胞。在老师和我们的帮助下，同学们很好解决了这些问题。
掌握好染色时间、染液量和染液冲洗是关键不好，上图为典型的染液冲洗不好的结果
实验报告批改情况
存在的问题与不足：
漏写：有些同学实验仪器及药品未写全;或厂家未标注;实验室温度湿度等环境记录;实验原理未写或写的不全面。
讨论：实验结果分析不到位；实验操作中的讨论过于宽泛；文献内容过多引用，缺乏自己的语言；一些讨论不够严谨，理论支持太少。
创新：创新方面未结合实验室实际情况，有些不实用。
有不少同学在报告中反映瑞士染色效果好于吉姆萨染色，这可能是由于正式实验中所使用吉姆萨染液比较新的原因。
在吉姆萨染液放置一个月后，染色效果有很大提高，在我组后期染色操作中发现，吉姆萨染色效果要优于瑞氏染液，因此总结到经验：吉姆萨染液最好提前一个月配置，暗处放置。
创新实验
1、进一步探究温度、离体时间对红细胞形态及渗透脆性 的影响；
2、利用紫外分光光度计测不同地深盐溶液中的溶血度；
3、探究白细胞染色片中的蓝紫色小颗粒聚集物来源
4、改良白细胞染色方法
一、探讨离体时间、温度对红细胞 形态及渗透脆性的影响
红细胞渗透脆性受细胞膜结构、细胞膜流动性、以及红细胞几何特性及红细胞膜抗张强度等多个因素的影响，其中与红细胞表面面积和体积的比值有很大关系。
通过批阅报告