文档介绍:犬瘟热及其诊断与防制
易感动物 CDV自然宿主谱十分广泛,目前己知可自然感染CDv的动物包括食肉目所有8个科、偶蹄目猪科、灵长目的猕猴属和鳍足目海豹科等多种动物。犬最易感,凡是养犬的地方都有本病的发生,特别常见于城市或犬类集中地体金富集的紫红色色线。试纸条如上图所示。
金标抗体
金标抗体-抗原-抗体复合物
抗金标抗体-金标抗体复合物
(吸水玻璃纤维)
包被抗体处
玻璃纤维素膜
吸水纸
包被抗金标抗体处
免疫胶体金抗体包被处
RT-PCR
RT-PCR 逆转录-聚合酶链式反应方法具有特异、敏感、快速诊断等优点。提取组织或细胞中的总RNA,以其中的RAN作为模板,采用特异性引物利用逆转录酶反转录成cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增,从而获得目的基因或检测基因表达,再进行电泳检测。
如王凤雪,闫喜军等以CDV 疫苗株N蛋白基因为研究对象,建立的CDV的RT-PCR检测方法用于毛皮动物犬瘟热诊断。
P1( 5’GATAAAGCATGTCATTATAGTCCTAA3’) ; P2 ( 5’CTTGAGCTTTCGACCCTTC 3’)
反转录( RT) 20uL反转录反应体系:反转录引物P2 1uL、RNA 5uL、70℃加热10min、冰浴10min,再加入5倍PCR buffer 4uL, dNTP2uL, ,AMV反转录酶1uL, DEPC H2O , 充分混合后离心,经42℃60min,95℃灭活AMV反转录酶,立即于冰上冷却,进入PCR。
:PCR反转录产物5uL, 10 倍PCR buffer 5uL, / L dNTP4uL,上、下游引物各1uL, rTaq DNA Polymerase 1uL, 加水补足50uL。PCR 的反应程序: 94℃ 45s, ℃ 45s, 72℃ 45s, 35 个循环后, 72℃延伸5min。取10uL PCR产物,以100bp Ladder作对照, 进行1. 2%琼脂糖凝胶电泳检测。
:琼脂糖凝胶电泳,在阳性对照孔出现相应扩增条带,而阴性对照孔无此条带时判定结果。若样品扩增条带与阳性对照扩增条带处于同一位置,则判定为CDV阳性,否则为阴性
包涵体检查
可刮取鼻、舌、结膜、瞬膜或刮取膀胱、肾盂、胆囊和胆管等粘膜,做成涂片,干燥,甲醛固定,苏木紫和伊红染色后镜检。包涵体红色见以胞浆内,一个细胞内可能有1-10个,平均2-3个,椭圆形或圆形,边缘清晰。发现包涵体可以作为诊断依据,但要与细小病毒的核内包涵体区别。有时仅仅根据包涵体的存在可能导致假阳性诊断,最好还要进行病毒分离鉴定或血清学检查。
CPV
CDV
血清学技术
血清中和试验:将备检血清稀释后加入标准病毒株,25℃作用2h,与制备好的犬肾或绿猴肾细胞悬液混合接种于微量培养板,5%CO2条件下35-36 ℃培养3d染色检查CPF。
荧光抗体检查技术:急性病犬的淋巴细胞、结膜。阴道细胞、脑脊髓液涂片做荧光抗体染色,其阳性胞浆显示弥散性荧光。亚急性或慢性病犬由于产生中和抗体,通常难以查出阳性细胞。
补体结合试验:多以CDV的Vero细胞或鸡胚成纤维细胞培养物为抗原,检查备检血清中的补体结合抗体。因该抗体出现于感染后2-3周,维持时间也短,所以只能作为一种证明近期感染的方法。
预防犬瘟热最有效的办法是接种疫苗,常规疫苗有灭活苗、弱毒疫苗,新型疫苗有重组苗、亚单位苗、多肤苗等。灭活疫苗能刺激多种动物产生体液免疫,但免疫持续时间短,免疫途径单一,使用范围受到限制。弱毒疫苗免疫效果好,目前广泛用于经济动物和犬的免疫,但弱毒疫苗也存在着一些弊端,一是易受母源抗体干扰,能引起的一过性的免疫抑制和血小板减少;二是残毒,某些疫苗株的毒力残留能导致免疫动物的脑炎;三是对一种动物安全的活疫苗对其他食肉动物、野生动物非常敏感,易造成散毒的危险,如小熊猫接种CD活苗发生CD甚至死亡,接种CDV致弱的活苗的黑蹄雪貂死于CD。鉴于现行CDV弱毒疫苗的上述缺陷,对犬瘟热的防制目前正致力于重组苗、亚单位苗、多肤苗等新型疫苗的研制
犬瘟热的防制
只有完整的CDV才能使犬同时产生细胞免疫和体液免疫,而且只有同时具备这两种免疫力的犬才能对CDV产生完全的免疫。体液免疫主要由中和抗体组成,抑制病毒感染细胞。已经进入细胞内的病毒则需要依靠细胞免疫来清除。
体液免疫可以通过初乳和胎盘被动传递给新生幼犬,在一定时间内,免受CDV感染,但也可干扰疫苗的