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2×CTAB法植物总DNA提取.pdf

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2×CTAB法植物总DNA提取.pdf

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文档介绍

文档介绍:: .

EDTA () 去离子水
54g 20ml 定容至 1L
室温保存

50×TAE 缓冲液
Tris 冰乙酸 EDTA () 去离子水
242g 100ml 定容至 1L
室温保存

2×CTAB
成分 终浓度 已有溶液浓度 配 100ml 所加量
CTAB 2% 2 g
Tris-HCl() 100mM 1M 10 ml
EDTA 20 mM 4 ml
NaCl 5M 28 ml

EDTA ()
二水乙二***四乙酸二钠 · 去离子水
Na2EDTA 2H2O NaOH
约 20 克 定容至 1L
高温高压灭菌,室温保存。
注:只有 pH 值接近 时,EDTA 才能完全溶解。溶解过程可在磁力搅拌器上剧烈搅拌。

耗材准备:

需要灭菌者: 离心管、研磨枪头、蓝色枪头、黄色枪头、
其他:卫生纸(吸水用)、镊子、封口膜、挑菌、针 酒精灯、 70%酒精、离心管架子、离心
管盒子、移液枪。
CTAB 法提取植物基因组

药品:
2*CTAB
终浓度 组分 1M Tris-HCl() 100ml
20nM/L EDTA() 40 ml
NaCl 82g
CTAB 20g
PVP40 20g

加去离子水 800ml 充分溶解定容到 1L。120℃ 个大气压,灭菌 20 分钟
用之前加 -1%的

EDTA()
配制量: 1L
配制方法:
1. 称取 Na2EDTA•2H2O,置于 1L 烧杯中。
2. 加入约 800mL 的去离子水,充分搅拌。
3. 用 NaOH 调节 pH 值值 (约 20g NaOH)。
注意:pH 值至 时,EDTA 才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至 1L。
5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。
6. 室温保存

1M Tris-HCl()
***仿 :异戊醇 24:1 异丙醇

流程
1、 研钵预冷,叶片放入研钵,加液氮,研磨成粉末,用小勺放入 管。
2、 加入 65℃预热的 2*CTAB 600ul,摇匀;
3、 65℃水浴 1 小时,10min 摇动一次
4、 12000rpm 离心 10min, 取上清到

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