文档介绍：细胞表面分子的检测与分析
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汇报人：视样本的染色
影响抗原抗体反应的因素
电解质、反应温度与时间 、PH值（～）
流式抗体的选择
根据流式细胞仪的类型选择抗体
抗体应用级别、滴度和使用量的选择
根据抗原表达量选择抗体
溶血，即裂解红细胞。它是流式细胞术分析白细胞的先决条件。溶血不好，白细胞群不能很好分开，溶血好坏直接影响检测结果。因此，必须对溶血过程进行严格控制。
全血样本：溶血效果很重要
影响溶血的因素：采血过程
溶血剂的使用
实验操作过程
结语
流式细胞术的样本制备没有一个黄金标准
最佳样本制备方法需要根据具体情况独立设定评估
常用的荧光染料
荧光染料 激发波长 (nm) 发射波长(nm) 用途 颜色
FITC 488 525 免疫荧光 绿色
PE(RD1) 488 575 免疫荧光 橙色
ECD 488 620 免疫荧光 橙红
PeCy5 488 675 免疫荧光 红
PI 488 620 DNA染色 橙红
PECy7 488 755 免疫荧光 深红
PerCP 488 670 免疫荧光 深红
参考书籍
《实用流式细胞术彩***谱》王书奎主编
《流式细胞术基本原理与实用技术》梁智辉主编
《临床流式细胞分析》 王建中主编
《流式细胞术》 杜立颖主编
实验：人外周血T淋巴细胞亚群的 检测与分析
淋巴细胞
单核细胞
粒细胞
这三群细胞分别由具有不同功能的细胞组成
这些细胞数量不等，甚至非常稀少
这些细胞表达不同的标记物，是用来区分它们的基础
T淋巴细胞(CD3+)
名 称
功 能
CD3+CD4+
辅助性/诱导性T细胞(Th/Ti)
辅助和诱导细胞免疫和体液免疫
CD3+CD4+CD29+
CD3+CD4+CD29-
辅助性T细胞(Th)
诱导性T细胞(Ti)
辅助细胞免疫和体液免疫
诱导细胞免疫和体液免疫
CD3+CD8+
抑制性/杀伤性T细胞(Ts/Tc)
抑制免疫反应/杀伤异源细胞
CD3+CD8+CD28-
CD3+CD4+CD29-
抑制性T细胞(Ts)
杀伤性T细胞(Tc)
抑制细胞和体液免疫
细胞毒性T细胞
CD3+CD4+CD8+
活化的T细胞
在T细胞恶性增生时升高
CD3+CD4-CD8-
有调节功能的T细胞,其表达 / T细胞受体(TCR / )
CD4+/CD8+比值
CD45RA+CD45RO-
幼稚的/静止的T淋巴细胞
当免疫系统没有能力更新辅助性或抑制性/细胞毒性淋巴细胞的祖细胞时此细胞亚群较低
CD45RA-CD45RO+
记忆性T淋巴细胞
病菌感染时升高, 但在慢性病毒感染, 如HIV患者中降低
CD45RA+CD45RO+
活化的T细胞, 感染时升高
感染时升高
活化T淋巴细胞
名 称
功 能
CD3+HLA-DR+
活化T细胞
CD4+HLA-DR+
活化的辅助性/诱导性T细胞
CD8+HLA-DR+
活化的抑制性/杀伤性T细胞
CD4+CD25+
活化的辅助性/诱导性T细胞
CD8+ CD25+
CD8+CD38+HLA-DR+
活化的抑制性/杀伤性T细胞
在病毒感染的患者中增加; 其增加意味着HIV患者的预后较