文档介绍：1 / 9
酸性磷酸酶的检测实验报告
实验目的
以Gomori铅法为例学****细胞化学方法检测水解酶的原理和方法。
掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
观察巨噬细胞内酸性磷酸酶的分布进一步了解溶酶体的结构
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酸性磷酸酶的检测实验报告
实验目的
以Gomori铅法为例学****细胞化学方法检测水解酶的原理和方法。
掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
观察巨噬细胞内酸性磷酸酶的分布进一步了解溶酶体的结构和功能。
实验原理
向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
由于无法直接观察酸性磷酸酶的分布，可以通过检测酸性磷酸酶代谢产物的方法间接观察。酸性磷酸酶催化反应。再通过福尔马林-钙固定，再通过显色与染色过程。在光镜油镜下可观察到黑色颗粒，也就是硫化铅沉淀，从而观测酸性磷酸酶在巨噬细胞中的分布。
实验材料及设备
实验材料：
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连续三天向腹腔中注射1mL6%淀粉肉汤的小鼠一只
酸性磷酸酶工作液，
福尔马林-钙固定液
2%硫化铵溶液
%沙黄染液
实验设备：
普通光学显微镜
载玻片若干
4摄氏度冷藏柜
染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等
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实验方法及步骤
（一）实验组：
巨噬细胞采集与附着
配置6%淀粉肉汤，连续三天向小鼠腹腔内注射，注意不要伤害小鼠器官。
用脊髓脱臼法快速处死小鼠。在白瓷板上用剪刀打开小鼠腹腔，用适量生理盐水冲洗小鼠内脏。
用胶头滴管吸取生理盐水冲洗液，滴于洁净的载玻片上，注意不要涂抹，每个载玻片各滴两滴，注意做好编号与正反标记。
将载玻片置于有U形玻璃支架的大型培养皿中。培养皿在4摄氏度的冷藏柜中放置30min。用吸水纸吸去多余生理盐水，注意不要让细胞完全干燥。
酶的反应
将玻片置于37摄氏度的酸性磷酸酶工作液中，温浴30min。生理盐水小心冲洗，吸去多余水分。
细胞的固定
将玻片置于福尔马林-钙固定液的染缸中，固定5min。蒸馏水冲洗，吸去多余水分。
显色
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2%硫化铵溶液中处理3~5min，取出载玻片，用蒸馏水漂洗。
普通光镜下初步观察，在视野中尝试找出黑色颗粒聚集的区域。
染色
%沙黄染液染色1~3min，蒸馏水漂洗后晾干。
观察
置于油镜下观察，寻找有细小黑色颗粒的巨噬细胞，并观察记录。
（二）对照组：
对照一：
在放入工作液前先用50摄氏度~80摄氏度的生理盐水处理30min，使酶失去活性。其余步骤与实验组相同。
对照二：
工作液中不添加β-甘油磷酸钠，用蒸馏水代替。其余步骤与实验组相同。
实验结果
实验组
染色前
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染色前在光镜下初步观察，可见细胞呈点状分布在载玻片上，细胞呈灰色，依稀可以看见巨噬细胞被细胞核挤成一圈的细胞质基质的轮廓，细胞中间更透明。由于未使用油镜且未染色，不规则的细胞形状与色彩给寻找溶酶体带来了巨大的难度。故染色后进行正式观察。
染色后