第十二章 高效液相色谱法.ppt

文档介绍：*
第十二章高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography)
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§1 概述
一、现代HPLC的特点
由的
(1)高压:液体作流动相,流经色谱柱时所受的阻力大,
为加速,配备高压输液设备
(2)高速:分析时间为几~几十分钟
(3)高效:塔板数30000块/米,普通色谱法几千块/米
(3)高灵敏度:紫外检测器:检测限10-9g/mL
荧光检测器:检测限10-11g/mL
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二、HPLC与GC的区别
1. 分析对象范围广
GC:对象:气体或低沸点的化合物,占20%
HPLC:可用于沸点高、摩尔质量大、热稳定性差的物质,占80%
2. 流动相选择余地大,并对组分有亲和力,可增加选择性
GC:惰性气体,对组分无亲和力
HPLC:不同极性液体,对组分有亲和力,与固定相竞争组分,
可提高选择性
3. GC:高温 HPLC:室温
缺点:仪器昂贵,操作严格
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§2 理论基础
一、涡流扩散项A
使用颗粒较小且均匀的固定相可提高柱效
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二、纵向扩散项B/u
r:阻塞因子(常数),大小与组分在色谱柱中的扩散程度有关
Dm:组分分子在流动相中的扩散系数
Dm只有Dg的万分之一~十万分之一,当u≥,纵向扩散可以忽略
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三、传质阻力项Cu
流动相传质阻力项
固定相传质阻力项
:流动相迁移传质项。使用颗粒小且均匀的固定相
可降低这一项
:柱系数,与色谱柱的直径、形状及固定相的结构有关
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:流动相滞留传质项。
:柱系数,与颗粒微孔中被流动相所占据部分的分数
及分配比有关
:固定相的液膜厚度
:常数
:组分分子在固定相中的扩散系数
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§3 HPLC仪器
四大主要部分:
高压输液系统
进样系统
分离系统
检测系统
辅助部分:
梯度淋洗
自动进样
数据处理
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一、高压输液系统
1. 组成:贮液器、高压泵、梯度洗脱装置
2. 贮液器:贮存流动相
3. 高压泵:
要求:(1)输出压力足够,使流动相顺利通过色谱柱
(2)输出流量恒定,精度1~2%(恒压泵、恒流泵)
(3)流量范围广,流速可调
(4)压力平稳,脉动小
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4. 梯度洗脱装置:(相当于气相色谱中的程序性升温)
通过连续改变流动相的极性、离子强度、pH值以改变被测组分的相对保留值,进而提高分离效率,提高选择性