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文档介绍:chap16糖类药物



第一节 糖类药物制备的一般方法
一:单糖及其衍生物的制备
游离单糖及小分子寡糖易溶于冷水及温乙醇。
可以用水或中性条件下以50%乙醇为提取溶剂,也可以以82%乙醇,在70-80摄氏度下回流提取。
二:多糖chap16糖类药物


第一节 糖类药物制备的一般方法
一:单糖及其衍生物的制备
游离单糖及小分子寡糖易溶于冷水及温乙醇。
可以用水或中性条件下以50%乙醇为提取溶剂,也可以以82%乙醇,在70-80摄氏度下回流提取。
二:多糖的分离于纯化
多糖可来自动物、植物和微生物。来源不同提取方法也不同。
植物体内含有水解多糖衍生物的酶,必须抑制或破坏酶的作用后,才能制取天然存在形式的多糖。
速冻冷藏是保存提取多糖材料的有效方法。
提取方法依照不同种类的多糖的溶解性质而定。
(-)多糖的提取
提取多糖时,一般先需进行脱脂,以便多糖释放。方法是将材料粉碎,用甲醇或1∶1乙醇***混合液,加热搅拌1~3小时,也可用石油醚脱脂。动物材料可用***脱脂、脱水处理。

1、难溶于冷水、热水,可溶于稀碱液者
多糖的提取方法主要有以下几种:
这一类多糖主要是不溶性胶类,如木聚精、半乳聚糖等。用冷水浸润材料后用0.5mol/L NaOH提取,提取液用盐酸中和、浓缩后,加乙醇沉淀得多糖。
如在稀碱中仍不易溶出者,可加入硼砂,对甘露聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸络合物的多糖,此法可得相当纯的物质。
2、易溶于温水、难溶于冷水和乙醇者
材料用冷水浸过,用热水提取,必要时可加热至80~90℃搅拌提取。
3、粘多糖
提取液用正丁醇与***仿混合液除去杂蛋白(或用三***乙酸除杂蛋白),离心除去杂蛋白后的清液,透析后用乙醇沉淀得多糖。
有些粘多糖可用水或盐溶液直接提取,但因大部粘多糖与蛋白质结合于细胞中,因此需用酶解法或碱解法使糖-白质间的结合键断裂,促使多糖释放
一般组织中存在多种粘多糖。需要对粘多糖进行分离纯化 。
(1)碱解法 多糖与蛋白质结合的糖肽键对碱不稳定,故可用碱解法使糖与蛋白质分开。
但若硫酸基与邻羟基处于反式结构或硫酸基在C-3或C-6,此时易发生脱硫作用。这类多糖不宜用碱解法提取。
(2)酶解法 理想的工具酶是专一性低的、具有广泛水解作用的蛋白酶。鉴于蛋白酶不能断裂糖肽键及其附近的肽键,为除去长肽段,常可与碱解法合用。
常用的酶制剂有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和链霉菌蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶。
(二)多糖的纯化
试剂和器材
一、试剂
平衡缓冲溶液:0.01mol/L Tris-HCL, PH=7.2。
洗脱液:A: 0.1mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2; B: 0.5mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2。
***仿、正丁醇、乙醇(95%)等,均为分析纯。
二、材料
灰树花子实体。
三、
器材
DEAE Sepharose Fast Flow,旋转真空蒸发仪,摇床,离心机,层析柱:26×10
操作方法

一、粗多糖的提取

将多糖子实体切碎烘干后称量,采用热水浸提法,每次原料和水之比均为1:5,浸提温度为70℃-80℃,浸提时间3-5h,共提取4次,合并4次浸提液。真空旋转蒸发浓缩,浓缩一倍体积。对多糖提取液需进行脱色处理,即以1%的比例加入活性炭,搅拌均匀15min后过滤即可。在浓缩液中加入3倍体积的乙醇搅拌,沉淀为多糖和蛋白质的混合物,此为粗多糖。 它只是一种多糖的混合物,其中可能存在中性多糖、酸性多糖、单糖、低聚糖、蛋白质和无机盐,必须进一步分离纯化。

二、粗多糖的纯化

粗多糖溶液加入Sevag试剂(***仿:正丁醇=3:1混合摇匀)后,置恒温振荡器中震荡过夜,使蛋白质充分沉淀,离心(3000r/min)分离,去除蛋白质。然后浓缩,透析,加入4倍体积的乙醇沉淀多糖,将沉淀冻干。

取样品0.1g溶于10ml 0.01mol/L Tris-HCL, PH=7.2的平衡缓冲液中。上样,用Buffer A: 0.1mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2; Buffer B: 0.5mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2 进行线性洗脱,分部收集。各管用硫酸苯酚法检测多糖。合并多糖高峰部分,浓缩后透析,冻干,即得多糖级分。
第二部分多糖的鉴定 实验原理
采用薄层层析法分析单糖组分。薄层层析显色后,比较多糖水解所得单糖斑点的颜色和Rf值与不同单糖标样参考斑点的颜色和Rf值,确定样品多糖的单糖组分。

多糖的分析鉴定一般借助于气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(IR

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上传人:小落意心冢 8/3/2022 文件大小:508 KB

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